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公開番号2024153636
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-10-29
出願番号2024106766,2020571344
出願日2024-07-02,2019-03-11
発明の名称新規のサイトカインプロドラッグ
出願人アスクジーン・ファーマ・インコーポレイテッド,AskGene Pharma, Inc.
代理人個人,個人
主分類A61K 47/62 20170101AFI20241022BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】サイトカイン変異タンパク質およびサイトカインプロドラッグ、ならびにこれらを製造し使用するための方法を提供する。
【解決手段】サイトカイン部分、マスキング部分、および担体部分を含むプロドラッグであって、マスキング部分が、サイトカイン部分に結合し、サイトカイン部分の生物学的活性を阻害し、サイトカイン部分が、担体部分に融合され、サイトカイン部分が、IL-15ポリペプチドまたはその機能的断片を含み、マスキング部分が、サイトカイン部分または担体部分に切断可能なペプチドリンカーを介して融合され、マスキング部分が、サイトカイン部分の受容体の細胞外ドメイン(ECD)を含むものであり、担体部分は、ノブ-イントゥ-ホール変異を含む抗体Fcドメインまたは抗体であり、サイトカイン部分およびマスキング部分は、抗体Fcドメインの異なるポリペプチド鎖または抗体の異なる重鎖に融合されている、プロドラッグを提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
サイトカイン部分、マスキング部分、および担体部分を含むプロドラッグであって、
前記マスキング部分が、前記サイトカイン部分に結合し、前記サイトカイン部分の生物学的活性を阻害し、
前記サイトカイン部分が、前記担体部分に融合され、
前記マスキング部分が、前記サイトカイン部分または前記担体部分に切断可能なペプチドリンカーを介して融合されるものである、前記プロドラッグ。
続きを表示（約 910 文字）【請求項２】
前記マスキング部分が、前記サイトカイン部分の受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む、請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項３】
前記サイトカイン部分が、野生型ヒトサイトカインまたはその変異タンパク質である、請求項１または２に記載のプロドラッグ。
【請求項４】
前記サイトカイン部分が、ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドである、請求項３に記載のプロドラッグ。
【請求項５】
前記ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドが、配列番号１または配列番号１に対して少なくとも９０％同一性であるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載のプロドラッグ。
【請求項６】
前記ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドが、Ｔ３、Ｋ３５、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｌ７２、Ａ７３、Ｎ８８、Ｃ１２５、およびＱ１２６（配列番号１によるナンバリング）から選択される位置における１つまたはそれ以上の変異を含む、請求項５に記載のプロドラッグ。
【請求項７】
前記ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドが、配列番号８～１７、１９～３３、３６、３７、および３９～４６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のプロドラッグ。
【請求項８】
前記マスキング部分が、ヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的類似体を含む、請求項４～７のいずれか１項に記載のプロドラッグ。
【請求項９】
前記マスキング部分が、（ｉ）ペプチドリンカーを介して一緒に融合されたヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的類似体の２コピー、あるいは（ｉｉ）ヒトＩＬ－２ＲγのＥＣＤまたはその機能的類似体にペプチドリンカーを介して融合されたヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的類似体を含む、請求項８に記載のプロドラッグ。
【請求項１０】
前記ヒトＩＬ－２ＲγのＥＣＤまたはその機能的類似体が、配列番号６または配列番号６に対して少なくとも９０％同一性であるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のプロドラッグ。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月９日提出の米国仮出願第６２／６４０，９６９号；２０１８年３月１４日提出の米国仮出願第６２／６４３，１０４号；２０１８年３月１７日提出の米国仮出願第６２／６４４，３８４号；２０１８年３月１８日提出の米国仮出願第６２／６４４、５７７号；２０１８年６月５日提出の米国仮出願第６２／６８０，７０７号；および２０１９年２月６日提出の米国仮出願第６２／８０１，６４９号からの優先権を主張する。前記先の出願の内容は、出典明示によりそれらの全体が本明細書に取り込まれる。
続きを表示（約 3,700 文字）【背景技術】
【０００２】
発明の背景
インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、リンパ球の産生、生存およびホメオスタシスにおいて中心的な役割を果たしている。これは、１３３個のアミノ酸を有し、その機能に必要な四次構造を形成する４つの逆平行の両親媒性アルファヘリックスからなる（Smith, Science 240:1169-76 (1988); Bazan, Science 257:410-13 (1992)）。
【０００３】
ＩＬ－２は、最大３つの各サブユニットからなるＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）に結合することによってその活性を生じる。α（ＣＤ２５またはＴａｃ抗原）、β（ＣＤ１２２）、およびγ（γ
ｃ
、共通のγ鎖、またはＣＤ１３２）サブユニットの結合は、三量体のＩＬ－２への高親和性受容体を生じる（Ｋ
Ｄ
～０．０１ｎＭ）。βおよびγサブユニットからなる二量体ＩＬ－２受容体は、中間親和性ＩＬ－２Ｒが付与される（Ｋ
Ｄ
～１ｎＭ）。αサブユニット単独では、単量体の低親和性ＩＬ－２受容体が形成される（Ｋ
Ｄ
～１０ｎＭ）。例えば、Kim et al., Cytokine Growth Factor Rev. 17:349-66 (2006)を参照のこと。二量体の中間親和性ＩＬ－２受容体は、三量体の高親和性受容体より約１００倍低い親和性でＩＬ－２に結合するが、二量体および三量体ＩＬ－２受容体の両方とも、ＩＬ－２結合によるシグナルを伝達することができる（Minami et al., Annu Rev Immunol. 11:245-68 (1993)）。よって、αサブユニットは、ＩＬ－２に対する受容体の高親和性結合を有しているが、ＩＬ－２シグナル伝達に必要ではないかもしれない。しかしながら、βおよびγサブユニットは、ＩＬ－２シグナル伝達に必須である（Krieg et al., Proc Natl Acad Sci. 107:11906-11 (2010)）。この三量体ＩＬ－２受容体は、ＣＤ４
＋
ＦｏｘＰ３
＋
制御性Ｔ（Ｔ
ｒｅｇ
）細胞で発現される。Ｔ
ｒｅｇ
細胞は、最も高いレベルのＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）をインビボで一貫して発現する（Fontenot et al., Nature Immunol 6:1142-51 (2005)）。前記三量体ＩＬ－２受容体はまた、従来の活性化Ｔ細胞で一時的に誘導される一方、静止期において、これらの細胞は二量体ＩＬ－２受容体のみを発現する。
【０００４】
目的に応じて、ＩＬ－２の変異タンパク質は、ＣＤ２５に対して亢進し、または低下した結合親和性を有するように作成された。ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ複合体の公開された結晶構造に基づくと、前記変異は、ＣＤ２５に近接することが知られているＩＬ－２またはその近辺の領域に入れられることが多い（Wang et al., Science 310:1159-63 (2005)）。ＩＬ－２残基Ｋ３５、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、およびＹ１０７は、ＣＤ２５に接触していると考えられている（米国特許第９，７３２，１３４号）。
【０００５】
ＩＬ－２治療の副作用を軽減するために、研究者らは、変異体ＩＬ－２をＣＤ２５に対するその結合親和性を減少させた。例えば、ＷＯ２００８／００３４４７３は、変異Ｒ３８ＷおよびＦ４２Ｋを記載し、ＷＯ２０１２／１０７４１７は、７２位における変異を記載する。米国特許公開第２００３／０１２４６７８号は、ＩＬ－２の血管透過活性を取り除くためにＲ３８Ｗ変異を導入することを記載する。Ｈｅａｔｏｎら（Cancer Res. 53:2597-602 (1993)；米国特許第５，２２９，１０９号）は、２つの変異Ｒ３８ＡおよびＦ４２Ｋを導入して、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から炎症促進性サイトカインの分泌を有する能力を減少させたＩＬ－２変異タンパク質を得ることを記載する。ＥＰ２６３９２４１Ｂ１は、Ｔ
ｒｅｇ
細胞の活性化において内在性ＩＬ－２より少なくとも１０００倍以下の有用性であるＩＬ－２変異タンパク質を記載し、１）Ｒ３８Ｋ、Ｆ４２Ｉ、Ｙ４５Ｎ、Ｅ６２Ｌ、およびＥ６８Ｖ；２）Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｉ、Ｙ４５Ｎ、Ｅ６２Ｌ、およびＥ６８Ｖ；３）Ｒ３８Ｋ、Ｆ４２Ｋ、Ｙ４５Ｒ、Ｅ６２Ｌ、およびＥ６８Ｖ；または４）Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａから選択される変異を有するＩＬ－２変異タンパク質を記載する。米国特許公開第２０１４／０３２８７９１号は、ＣＤ２５に対して親和性が低下したペグ化ＩＬ－２を記載する。あるＩＬ－２変異タンパク質は、腫瘍抗原を標的とする抗体（例えば、ＣＥＡ、ＦＡＰ、およびＰＤ－Ｌ１など）に抱合されている。例えば、Klein et al., Oncoimmunology 6(3):e1277306 (2017)；Soerensen et al., J Clin Onc. 36:15_suppl (2018)；ＷＯ２０１７／２２０９８９；および米国特許第９，２０６，２６０号を参照のこと。
【０００６】
インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、ＩＬ－２に構造類似性を有するサイトカインである。ＩＬ－１５は、ＩＬ－２Ｒβγ受容体に結合し、これによりシグナル伝達し、ウイルス感染後に単核食細胞系および他の免疫細胞によって分泌される。ＩＬ－１５は、ＮＫおよび自然免疫系の他の細胞の増殖を誘導し、ウイルス感染細胞および癌細胞の死滅に関連する。
【０００７】
残念なことに、現在のＩＬ－２およびＩＬ－１５薬物候補の副作用は著しく、前記サイトカインの投薬量が制限される。さらに、Ｔ細胞および他の免疫細胞の活性化は部位特異的ではない。また、ＣＤ２５に対する親和性は顕著に減少しているが、ＩＬ－２変異タンパク質のＰＫシンカーが存在しうる。よって、免疫細胞を活性化し、有効性を有するが、減少した副作用を示す際に部位特異的である改善されたサイトカイン治療を開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００８】
本開示は、サイトカイン部分、マスキング部分、および担体部分を含むプロドラッグであって、前記マスキング部分が、前記サイトカイン部分に結合し、前記サイトカイン部分の生物学的活性を阻害し（例えば、サイトカイン部分が標的細胞におけるその受容体に結合することを阻害し、または前記サイトカイン部分の１つまたはそれ以上の生物学的活性を減少させる）、前記サイトカイン部分が、前記担体部分に融合され、前記マスキング部分が、切断可能なペプチドリンカーを介して前記サイトカイン部分または前記担体部分に融合されているプロドラッグを提供する。ある実施態様において、前記マスキング部分は、前記サイトカイン部分の受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。
【０００９】
ある実施態様において、前記サイトカイン部分は、野生型ヒトサイトカインまたはその変異タンパク質、例えば、ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチド、例えば、配列番号１または配列番号１に対して少なくとも９０％同一性であるアミノ酸配列を含むものである。ある実施態様において、前記ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドには、Ｔ３、Ｋ３５、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｌ７２、Ａ７３、Ｎ８８、Ｃ１２５、およびＱ１２６（配列番号１によるナンバリング）から選択される位置における１つまたはそれ以上の変異が含まれる。特定の実施態様において、前記ヒトＩＬ－２アゴニストポリペプチドには、配列番号８～１７、１９～３３、３６、３７、および３９～４６から選択されるアミノ酸配列が含まれる。
【００１０】
ある実施態様において、本発明のプロドラッグのマスキング部分は、ヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的類似体を含む。さらなる実施態様において、前記マスキング部分には、（ｉ）ペプチドリンカーを介して一緒に融合されたヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的類似体の２コピー、または（ｉｉ）ペプチドリンカーを介してヒトＩＬ－２ＲγのＥＣＤまたはその機能的類似体に融合されたＥＣＤヒトＩＬ－２Ｒβまたはその機能的類似体が含まれる。ある実施態様において、前記ヒトＩＬ－２ＲγのＥＣＤまたはその機能的類似体は、配列番号６または配列番号６に対して少なくとも９０％同一性であるアミノ酸配列を含む。特定の実施態様において、前記ヒトＩＬ－２ＲβのＥＣＤまたはその機能的類似体は、配列番号３、４、または５、あるいは配列番号３、４、または５に対して少なくとも９０％同一性であるアミノ酸配列を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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