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公開番号2025118753
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-08-13
出願番号2025076140,2022525717
出願日2025-05-01,2020-11-06
発明の名称ヘテロIgG分子の対合のための電荷対変異の操作
出願人アムジエン・インコーポレーテツド
代理人弁理士法人川口國際特許事務所
主分類C12N 15/13 20060101AFI20250805BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】抗体CH3ドメイン及びヘテロ二量体の形成の促進に有用な変異を含む、ヘテロ二量体を提供する。
【解決手段】第1のCH3ドメインポリペプチド及び第2のCH3ドメインポリペプチドを含むヘテロ二量体CH3ドメインを含み、第1のCH3ドメインポリペプチドはK360位にアミノ酸の改変を含む、単離されたヘテロ多量体であって、(i)第1のCH3ドメインポリペプチドはさらにK370位にアミノ酸の改変を含み、(ii)第2のCH3ドメインポリペプチドはE357位にアミノ酸の改変を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、Kabatに記載されるEUインデックスによる、単離ヘテロ多量体を提供する。特定のpHでのヘテロ二量体の精製を最適化する方法もまた提供される。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
第１のＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含むヘテロ二量体ＣＨ３ドメインを含み、前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチドはＫ３６０位にアミノ酸の改変を含む、単離されたヘテロ多量体であって、
（ｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチドはさらにＫ３７０位にアミノ酸の改変を含み、
（ｉｉ）前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチドはＥ３５７位にアミノ酸の改変を含み、
ここで、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによる、
単離ヘテロ多量体。
続きを表示（約 950 文字）【請求項２】
前記Ｋ３６０位におけるアミノ酸の改変は、Ｋ３６０Ｅ及びＫ３６０Ｄからなる群から選択される、請求項１に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項３】
前記Ｋ３７０位におけるアミノ酸の改変は、Ｋ３７０Ｅ及びＫ３７０Ｄからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項４】
前記Ｅ３５７位におけるアミノ酸の改変は、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｈ及びＥ３５７Ｒからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項５】
前記Ｋ３６０位のアミノ酸の改変はＫ３６０Ｅであり、前記Ｋ３７０位のアミノ酸の改変はＫ３７０Ｄであり、前記Ｅ３５７位のアミノ酸の改変はＥ３５７Ｋである、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項６】
一方のＣＨ３ドメインポリペプチドはさらにＫ４０９位にアミノ酸の改変を含み、他方のＣＨ３ドメインポリペプチドはさらにＤ３９９位にアミノ酸の改変を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項７】
前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチドが前記Ｋ４０９位にアミノ酸の改変を含み、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチドが前記Ｄ３９９位にアミノ酸の改変を含む、請求項６に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項８】
前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチドが前記Ｄ３９９位にアミノ酸の改変を含み、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチドが前記Ｋ４０９位にアミノ酸の改変を含む、請求項６に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項９】
前記Ｋ４０９位におけるアミノ酸の改変はＫ４０９Ｅ及びＫ４０９Ｄからなる群から選択され、前記Ｄ３９９位におけるアミノ酸の改変はＤ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｈ及びＤ３９９Ｒからなる群から選択される、請求項６～８のいずれか一項に記載の単離ヘテロ多量体。
【請求項１０】
前記Ｋ４０９位のアミノ酸の改変はＫ４０９Ｄであり、前記Ｄ３９９位のアミノ酸の改変はＤ３９９Ｋである、請求項６～９のいずれか一項に記載の単離ヘテロ多量体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質工学の分野に関する。具体的には、本発明は、ヘテロＩｇＧ分子の結晶性フラグメント（Ｆｃ）中の荷電残基を操作して、ホモＦｃ形成を阻止し、ヘテロＦｃ形成を駆動することに関する。
続きを表示（約 1,800 文字）【０００２】
本出願は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．セクション１．８２１（ｃ）及び１．８２１（ｅ）によって要求されるコンピューター可読形式（ＣＲＦ）及び紙の複写の両方の役割を果たし、且つその全体が参照により本明細書に組み込まれるＡＳＣＩＩ「ｔｘｔ」準拠の配列表を含む。２０２０年１１月６日に作成された「ｔｘｔ」ファイルの名称は、Ａ－２３８９－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿１１０６２０２０＿ＳＴ２５であり、２３．６ｋｂのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
ＩｇＧ分子のＦｃ領域の天然の形成は、Ｆａｂアームの配列とは独立して、２つの一致するＦｃ鎖のアセンブリを含む。二重特異性抗体は、２つ以上の異なる抗原に対して標的特異性を有する。これは、異なる配列からなる２つのＦａｂアームによるものである。その結果、天然のＦｃ領域を有する二重特異性分子は、重鎖分子を、１つの抗原に結合するモノクローナル抗体、第２の抗原に結合するモノクローナル抗体、及び両方の抗原に結合する二重特異性抗体からなる３つの主要な種に組み立てる傾向がある。
【０００４】
これらの組換えタンパク質を発現させる際に、モノクローナル抗体の形成を防止するために、ＩｇＧ分子を主にＣＨ３領域において操作している。ＩｇＧ重鎖間の鎖対合の駆動に関する初期の研究は、鎖間の表面領域の輪郭がより大きな残基及びより小さな残基への変異で改変される、ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂｉｎｈｏｌｅ）戦略の使用から始まった。広く実施されているより最近のアプローチは電荷対変異の使用であり、２つの回転対称領域の一方における天然に荷電した残基を、正に荷電した残基を負に荷電した残基に変異させることによって、またその逆に負に荷電した残基を正に荷電した残基に変異させることによって逆転させる。このアプローチを１対の荷電残基に適用すると、一致するＦｃ領域間の２つの反発点と、異なるＦｃ領域間に塩橋を形成する２つの引き合う点とが生じる。我々の研究において、Ｆｃ領域における３対の荷電残基の残基をスクリーニングして最適化し、また、対合特異性への駆動の強化、及びより低いｐＨでの精製という利点を付加するために、隣接残基を試験した。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含むヘテロ二量体ＣＨ３ドメインを含み、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドはＫ３６０位にアミノ酸の改変を含む、単離されたヘテロ多量体であって、（ｉ）第１のＣＨ３ドメインポリペプチドはさらにＫ３７０位にアミノ酸の改変を含み、（ｉｉ）第２のＣＨ３ドメインポリペプチドはＥ３５７位にアミノ酸の改変を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによる、単離ヘテロ多量体を対象とする。
【０００６】
別の態様では、本発明は、約ｐＨ５．０で単離されたヘテロ多量体を安定化する方法であって、ヘテロ多量体は第１のＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含むヘテロ二量体ＣＨ３ドメインを含み、（ｉ）第１のＣＨ３ドメインポリペプチドはＫ３７０にアミノ酸の改変を含み、（ｉｉ）第２のＣＨ３ドメインポリペプチドはＥ３５７位にアミノ酸の改変を含む方法において、第１のＣＨ３ドメインのＫ３６０位にアミノ酸の改変を導入することを含み、この改変はグルタミン酸又はアスパラギン酸でのＫ３６０の置換であり、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによる、方法を対象とする。
【０００７】
一実施形態では、Ｋ３６０位におけるアミノ酸の改変は、Ｋ３６０Ｅ及びＫ３６０Ｄからなる群から選択される。
【０００８】
一実施形態では、Ｋ３７０位におけるアミノ酸の改変は、Ｋ３７０Ｅ及びＫ３７０Ｄからなる群から選択される。
【０００９】
一実施形態では、Ｅ３５７位におけるアミノ酸の改変は、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｈ及びＥ３５７Ｒからなる群から選択される。
【００１０】
一実施形態では、Ｋ３６０位のアミノ酸の改変はＫ３６０Ｅであり、Ｋ３７０位のアミノ酸の改変はＫ３７０Ｄであり、Ｅ３５７位のアミノ酸の改変はＥ３５７Ｋである。
（【００１１】以降は省略されています）

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