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公開番号2025109930
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-25
出願番号2025084765,2022500316
出願日2025-05-21,2021-01-29
発明の名称FormII型の還元型補酵素Q10結晶の製造方法
出願人株式会社カネカ
代理人弁理士法人平木国際特許事務所
主分類C07C 41/40 20060101AFI20250717BHJP(有機化学)
要約【課題】本発明は、安定型の結晶形である還元型補酵素Q10のFormII型結晶を得るための効率的な製造方法を提供する。
【解決手段】本発明の製造方法は、エタノールと還元型補酵素Q10とを含有する混合液に、FormII型結晶の種晶を添加する工程、及び、FormII型結晶を析出させることを含み、種晶添加前の還元型補酵素Q10の溶存濃度C_iが、種晶添加時の温度T_iでの、FormII型結晶の飽和濃度以上且つFormI型結晶の飽和濃度未満であり、結晶析出工程が、前記混合液の温度T_pを、還元型補酵素Q10の溶存濃度C_pが、FormII型結晶の飽和濃度以上であり且つFormI型結晶の飽和濃度未満となるように調節することを含む。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
エタノールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加すること、及び、
前記種晶の添加後の前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含み、
前記種晶の添加前の前記混合液中の還元型補酵素Ｑ１０の溶存濃度Ｃ
ｉ
が、前記種晶を添加する時点での前記混合液の温度Ｔ
ｉ
において、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の飽和濃度以上であり且つＦｏｒｍＩ型結晶の飽和濃度未満であり、
前記結晶を析出させる工程において、前記混合液の温度Ｔ
ｐ
を、前記混合液中の還元型補酵素Ｑ１０の溶存濃度Ｃ
ｐ
が、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の飽和濃度以上であり且つＦｏｒｍＩ型結晶の飽和濃度未満となるように、調節することを含む、
ことを特徴とする、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の製造方法。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
エタノールが水を含んでいてもよく、水とエタノールとの総量に対して、エタノール濃度がＺ（ｖ／ｖ）％であり、前記Ｚは９０～１００であり、
前記Ｃ
ｉ
及び前記Ｃ
ｐ
の単位を重量％、前記Ｔ
ｉ
及び前記Ｔ
ｐ
の単位をＫとしたとき、
前記Ｃ
ｉ
及び前記Ｃ
ｐ
が１．５重量％以上である場合において、
下記の条件
（式１）Ａ
ＩＩ
・Ｔ
ｉ
＋Ｂ
ＩＩ
≦ｌｏｇＣ
ｉ
＜Ａ
Ｉ
・Ｔ
ｉ
＋Ｂ
Ｉ
（式２）Ａ
ＩＩ
・Ｔ
ｐ
＋Ｂ
ＩＩ
≦ｌｏｇＣ
ｐ
＜Ａ
Ｉ
・Ｔ
ｐ
＋Ｂ
Ｉ
（式３）Ａ
Ｉ
＝０．００８９・Ｚ－０．６７５４
（式４）Ｂ
Ｉ
＝－２．３６０７・Ｚ＋１７２．７０
（式５）Ａ
ＩＩ
＝０．００８６・Ｚ－０．６８４４
（式６）Ｂ
ＩＩ
＝－２．３１７８・Ｚ＋１７８．２６
を全て満足する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記Ｔ
ｉ
が２０℃以上４３℃以下である、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記Ｔ
ｉ
が２０℃以上３２℃未満である、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項５】
前記Ｔ
ｐ
が５℃以上４３℃以下である、請求項１～４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
前記結晶を析出させることが、前記Ｔ
ｐ
を一定の温度に保持することを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
前記結晶を析出させることが、前記Ｔ
ｐ
を経時的に低下させることを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
前記結晶を析出させることが、
前記Ｔ
ｐ
を２０℃以上４３℃以下の範囲の一定の温度に保持すること、及び
続いて、前記混合液の温度を２５℃以下であり且つ前記一定の温度未満の温度に、－１５℃／時間以下の速度で低下させること
を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の製造方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、安定性に優れたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の製造方法に関する。
続きを表示（約 3,900 文字）【背景技術】
【０００２】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分であり、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として知られている。補酵素Ｑは、ミトコンドリア内で酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っているほか、還元型補酵素Ｑは抗酸化作用を持つことが知られている。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ補酵素Ｑ１０が主成分であり、生体内においては、通常、４０～９０％程度が還元型として存在している。補酵素Ｑの生理的作用としては、ミトコンドリア賦活作用によるエネルギー生産の活性化、心機能の活性化、細胞膜の安定化効果、抗酸化作用による細胞の保護効果等が挙げられている。
【０００３】
現在製造・販売されている補酵素Ｑ１０の多くは酸化型補酵素Ｑ１０であるが、近年では、酸化型補酵素Ｑ１０に比べて高い経口吸収性を示す還元型補酵素Ｑ１０も市場に登場し、用いられるようになってきている。
【０００４】
還元型補酵素Ｑ１０を得る一般的な方法は既に開示されている（特許文献１）。さらに、還元型補酵素Ｑ１０を結晶として得る方法についても、いくつかの方法が知られている。例えば、還元型補酵素Ｑ１０をアルコール溶液及び／又はケトン溶液中において晶出させ、結晶を製造する方法（特許文献２）や、還元型補酵素Ｑ１０の高濃度液相を貧溶媒中に添加することで結晶化を行う方法（特許文献３）などが報告されている。
【０００５】
一方、特許文献４には、還元型補酵素Ｑ１０に結晶多形現象が見られることが記載されており、新たに出現した結晶形（以下、この結晶をＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶、又は、ＦｏｒｍＩＩ型結晶と呼称する）は従来の還元型補酵素Ｑ１０（以下、この結晶をＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶、又は、ＦｏｒｍＩ型結晶と呼称する）より非常に安定で、その他の物理特性にも優れていると報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
特開平１０－１０９９３３号公報
ＷＯ２００３／００６４０９号公報
特開２００３－０８９６６９号公報
ＷＯ２０１２／１７６８４２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献４には、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の取得方法として、特定の条件で晶析を行う方法が記載されているが、長時間を要する上に回収量が少ない場合があり、必ずしも工業的には最適とはいえない方法である。また、予備検討の結果、晶析時にいったんＦｏｒｍＩ型結晶が析出すると、その後はＦｏｒｍＩＩ型結晶に優先してＦｏｒｍＩ型結晶が析出し、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の回収率が低くなることが分かった。そのため、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を高い回収率で効率的に取得するためには、ＦｏｒｍＩＩ型結晶のみを選択的に析出させる必要がある。
そこで本発明は、安定型の結晶形であるＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得るための効率的な製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、エタノール中では、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の飽和濃度が、ＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の飽和濃度よりも低いことを見出した。そしてこの知見に基づき、以下の方法により、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を効率よく得ることができることを見出した。
（１）エタノールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加すること、及び、
前記種晶の添加後の前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含み、
前記種晶の添加前の前記混合液中の還元型補酵素Ｑ１０の溶存濃度Ｃ
ｉ
が、前記種晶を添加する時点での前記混合液の温度Ｔ
ｉ
において、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の飽和濃度以上であり且つＦｏｒｍＩ型結晶の飽和濃度未満であり、
前記結晶を析出させる工程において、前記混合液の温度Ｔ
ｐ
を、前記混合液中の還元型補酵素Ｑ１０の溶存濃度Ｃ
ｐ
が、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の飽和濃度以上であり且つＦｏｒｍＩ型結晶の飽和濃度未満となるように、調節することを含む、
ことを特徴とする、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の製造方法。
（２）エタノールが水を含んでいてもよく、水とエタノールとの総量に対して、エタノール濃度がＺ（ｖ／ｖ）％であり、前記Ｚは９０～１００であり、
前記Ｃ
ｉ
及び前記Ｃ
ｐ
の単位を重量％、前記Ｔ
ｉ
及び前記Ｔ
ｐ
の単位をＫとしたとき、
前記Ｃ
ｉ
及び前記Ｃ
ｐ
が１．５重量％以上である場合において、
下記の条件
（式１）Ａ
ＩＩ
・Ｔ
ｉ
＋Ｂ
ＩＩ
≦ｌｏｇＣ
ｉ
＜Ａ
Ｉ
・Ｔ
ｉ
＋Ｂ
Ｉ
（式２）Ａ
ＩＩ
・Ｔ
ｐ
＋Ｂ
ＩＩ
≦ｌｏｇＣ
ｐ
＜Ａ
Ｉ
・Ｔ
ｐ
＋Ｂ
Ｉ
（式３）Ａ
Ｉ
＝０．００８９・Ｚ－０．６７５４
（式４）Ｂ
Ｉ
＝－２．３６０７・Ｚ＋１７２．７０
（式５）Ａ
ＩＩ
＝０．００８６・Ｚ－０．６８４４
（式６）Ｂ
ＩＩ
＝－２．３１７８・Ｚ＋１７８．２６
を全て満足する、（１）に記載の製造方法。
（３）前記Ｔ
ｉ
が２０℃以上４３℃以下である、（１）又は（２）に記載の製造方法。
（４）前記Ｔ
ｉ
が２０℃以上３２℃未満である、（１）又は（２）に記載の製造方法。
（５）前記Ｔ
ｐ
が５℃以上４３℃以下である、（１）～（４）のいずれかに記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法によれば、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を効率よく製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
図１は、９９．５（ｖ／ｖ）％、９５（ｖ／ｖ）％、９０（ｖ／ｖ）％の各エタノール濃度の含水エタノール中での、ＦｏｒｍＩ型結晶、及び、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の溶解度を、温度（Ｋ）をｘ軸、還元型補酵素Ｑ１０結晶の溶解度（重量％）をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図２は、９９．５（ｖ／ｖ）％含水エタノール中でのＦｏｒｍＩ型結晶及びＦｏｒｍＩＩ型結晶の溶解度を、温度（Ｋ）をｘ軸、還元型補酵素Ｑ１０結晶の溶解度（重量％）の自然対数をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図３は、９５（ｖ／ｖ）％含水エタノール中でのＦｏｒｍＩ型結晶及びＦｏｒｍＩＩ型結晶の溶解度を、温度（Ｋ）をｘ軸、還元型補酵素Ｑ１０結晶の溶解度（重量％）の自然対数をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図４は、９０（ｖ／ｖ）％含水エタノール中でのＦｏｒｍＩ型結晶及びＦｏｒｍＩＩ型結晶の溶解度を、温度（Ｋ）をｘ軸、還元型補酵素Ｑ１０結晶の溶解度（重量％）の自然対数をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図５は、温度Ｔ（Ｋ）とＦｏｒｍＩ型結晶の溶解度（飽和濃度）Ｃ
Ｉ
（重量％）との関係式（式７）ｌｏｇＣ
Ｉ
＝Ａ
Ｉ
・Ｔ＋Ｂ
Ｉ
における定数Ａ
Ｉ
の、エタノール濃度との相関関係を確認するため、エタノール濃度をｘ軸、Ａ
Ｉ
の値をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図６は、上記式７における定数Ｂ
Ｉ
の、エタノール濃度との相関関係を確認するため、エタノール濃度をｘ軸、Ｂ
Ｉ
の値をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図７は、温度Ｔ（Ｋ）とＦｏｒｍＩ型結晶の溶解度（飽和濃度）Ｃ
Ｉ
（重量％）との関係式（式８）ｌｏｇＣ
ＩＩ
＝Ａ
ＩＩ
・Ｔ＋Ｂ
ＩＩ
における定数Ａ
ＩＩ
の、エタノール濃度との相関関係を確認するため、エタノール濃度をｘ軸、Ａ
ＩＩ
の値をｙ軸としてプロットしたグラフである。
図８は、上記式８における定数Ｂ
ＩＩ
の、エタノール濃度との相関関係を確認するため、エタノール濃度をｘ軸、Ｂ
ＩＩ
の値をｙ軸としてプロットしたグラフである。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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