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公開番号2025108722
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-23
出願番号2025071948,2022180069
出願日2025-04-24,2015-07-22
発明の名称H因子結合タンパク質変異体及びその使用方法
出願人チルドレンズホスピタルアンドリサーチセンターアットオークランド
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 14/22 20060101AFI20250715BHJP(有機化学)
要約【課題】Neisseria meningitidis(髄膜炎菌)の少なくとも1菌株に対して殺菌性である抗体を誘発することができる変異体H因子結合タンパク質、かかるタンパク質を含む組成物、及びかかるタンパク質の使用方法を提供する。
【解決手段】H因子結合タンパク質(fHbp)の変異体であって、ヒトH因子(fH)と、ヒトfHに対するfHbpの親和性の50%以下の親和性で結合し、該変異体は、哺乳類宿主において、Neisseria meningitidisの少なくとも1菌株に対する殺菌性抗体反応を誘導する、fHbpの変異体。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）の変異体であって、該変異体が、以下：
（ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；
（ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；
（ｃ）アミノ酸１３０のアルギニンに対するグリシン置換（Ｒ１３０Ｇ）；
（ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；及び
（ｅ）アミノ酸２４８のロイシンに対するヒスチジン置換（Ｈ２４８Ｌ）
のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸置換を含み、
該アミノ酸置換が、ｆＨｂｐＩＤ１（配列番号１）に対するものであり、
該変異体が、配列番号１と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
該変異体ｆＨｂｐが、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の５０％以下の親和性で結合し、
該変異体が、哺乳類宿主において、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）の少なくとも１菌株に対する殺菌性抗体反応を誘導する、変異体。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
Ｑ３８での前記アミノ酸置換が、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｙ、またはＱ３８Ｗである、請求項１に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項３】
Ｅ９２での前記アミノ酸置換が、Ｅ９２Ｋ、Ｅ９２Ｒ、Ｅ９２Ｈ、Ｅ９２Ｆ、Ｅ９２Ｙ、またはＥ９２Ｗである、請求項１に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項４】
Ｓ２２３での前記アミノ酸置換が、Ｓ２２３Ｒ、Ｓ２２３Ｋ、Ｓ２２３Ｈ、Ｓ２２３Ｆ、Ｓ２２３Ｙ、またはＳ２２３Ｗである、請求項１に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項５】
ヒトｆＨと、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の２５％以下の親和性で結合する、請求項１に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項６】
ヒトｆＨと、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の１０％以下の親和性で結合する、請求項１に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項７】
ヒトｆＨと、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の５％以下の親和性で結合する、請求項１に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項８】
Ｒ４１Ｓ及びＲ４１Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を更に含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項９】
以下のアミノ酸置換Ｓ２２３Ｒ及びＨ２４８Ｌを更に含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の変異体ｆＨｂｐ。
【請求項１０】
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）の変異体であって、該変異体が、以下：
（ａ）アミノ酸１１５のアスパラギンに対するイソロイシン置換（Ｎ１１５Ｉ）；
（ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸に対するグリシン置換（Ｄ１２１Ｇ）；
（ｃ）アミノ酸１２８のセリンに対するトレオニン置換（Ｓ１２８Ｔ）；
（ｄ）位置１３１のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；
（ｅ）位置２１９のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；
（ｆ）位置２２０のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換
から選択されるアミノ酸置換を含み、
該アミノ酸置換が、ｆＨｂｐＩＤ２２（配列番号２）に対するものであり、
該変異体が、配列番号２と８５％より高いアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
該変異体ｆＨｂｐが、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の５０％以下の親和性で結合し、
該変異体が、哺乳類宿主において殺菌性抗体反応を誘導する、変異体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１４年７月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／０２８，１２３号の利益を主張し、該仮出願は、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 4,900 文字）【背景技術】
【０００２】
緒言
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）は、ヒト上気道にコロニーを形成するグラム陰性細菌であり、世界規模の散発性で周期的な集団発生、中でも注目すべきは髄膜炎及び敗血症の集団発生の原因である。その発病率及び罹患率は、２歳未満の小児で最も高い。他のグラム陰性細菌と同様、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓは通常、細胞質膜、ペプチドグリカン層、外膜を有し、これらは莢膜多糖とともに細菌細胞壁を構成し、また、外部環境に突出する腺毛を有する。Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの莢膜保有株は、小児および若年成人における細菌性髄膜炎および敗血症の主な原因である。侵襲性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ感染症の流行及び経済的重要性によって、異なる菌株にわたる、特に、異なる血清型または血清亜型を有する遺伝的に多様な血清群Ｂ株にわたる免疫を与えることができる有効なワクチンについての研究が促されてきた。
【０００３】
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ、当技術分野では、リポタンパク質２０８６（Ｆｌｅｔｃｈｅｒｅｔａｌ（２００４）ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ７２：２０８８－２１００（非特許文献1））、ゲノム由来ナイセリア抗原（ＧＮＡ）１８７０（Ｍａｓｉｇｎａｎｉｅｔａｌ．（２００３）ＪＥｘｐＭｅｄ１９７：７８９－９９（非特許文献2））または「７４１」とも呼ばれる）は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）のタンパク質であって、表面が露出したリポタンパク質として、該細菌で発現する。ｆＨｂｐの重要な機能は、ヒト補体因子Ｈ（ｆＨ）と結合することであって、これが補体活性化を下方制御する。該細菌表面へのｆＨの結合は、該病原菌が免疫されていないヒト血清または血液中で生存し、生来の宿主防御から逃れる重要な機序である。近年、ヒトＨ因子遺伝子クラスターの遺伝的変異が、髄膜炎菌性疾患の発症に対する感受性に影響を及ぼすことが見出された（ＤａｖｉｌａＳｅｔａｌ．（２０１０）ＮａｔＧｅｎｅｔｉｃｓｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｇ．６４０（非特許文献3））。ｆＨｂｐへのｆＨの結合は、ヒトｆＨ、及び一部の非ヒト霊長類に対して特異的であり、なぜＮｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓが専らヒト病原菌であるかが部分的に説明できる。ｆＨｂｐは、多くの天然配列変異体の状態で生じ、これらは、インターネット上のｆＨｂｐデータベース、ｐｕｂｍｌｓｔ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｎｅｉｓｓｅｒｉａ／ｆＨｂｐにて与えられる登録（ＩＤ）番号で表される。
【０００４】
効果的な殺菌性抗体反応を誘発することができるｆＨｂｐポリペプチドに対する必要性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
Ｆｌｅｔｃｈｅｒｅｔａｌ（２００４）ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ７２：２０８８－２１００
Ｍａｓｉｇｎａｎｉｅｔａｌ．（２００３）ＪＥｘｐＭｅｄ１９７：７８９－９９
ＤａｖｉｌａＳｅｔａｌ．（２０１０）ＮａｔＧｅｎｅｔｉｃｓｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｇ．６４０
【発明の概要】
【０００６】
概要
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの少なくとも１菌株に対して殺菌性である抗体を誘発できる変異体Ｈ因子結合タンパク質、かかるタンパク質を含む組成物、及びかかるタンパク質の使用方法を提供する。
【０００７】
特徴
本開示は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）ＩＤ１の変異体を提供する。本開示は、ｆＨｂｐの変異体であって：（ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；（ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；（ｃ）アミノ酸１３０のアルギニンに対するグリシン置換（Ｒ１３０Ｇ）；（ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；及び（ｅ）アミノ酸２４８のロイシンに対するヒスチジン置換（Ｈ２４８Ｌ）のうちの少なくとも１つから選択されるアミノ酸置換を含む変異体を提供するとともに、該アミノ酸置換は、ｆＨｂｐＩＤ１（配列番号１）に対するものであり、該変異体は、配列番号１と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、該変異体ｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の５０％以下の親和性で結合し、該変異体は、哺乳類宿主において、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの少なくとも１菌株に対する殺菌性抗体反応を誘導する。一部の例では、Ｑ３８でのアミノ酸置換はＱ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｙ、またはＱ３８Ｗである。一部の例では、Ｅ９２でのアミノ酸置換は、Ｅ９２Ｋ、Ｅ９２Ｒ、Ｅ９２Ｈ、Ｅ９２Ｆ、Ｅ９２Ｙ、またはＥ９２Ｗである。一部の例では、Ｓ２２３でのアミノ酸置換は、Ｓ２２３Ｒ、Ｓ２２３Ｋ、Ｓ２２３Ｈ、Ｓ２２３Ｆ、Ｓ２２３Ｙ、またはＳ２２３Ｗである。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、さらに、ｆＨｂｐＩＤ１に対して、Ｒ４１ＳまたはＲ４１Ａの置換を含んでよい。例えば、変異体ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐＩＤ１に対して、Ｒ４１ＳまたはＲ４１Ａの置換及びＳ２２３での置換、例えば、Ｒ４１Ｓ／Ｓ２２３Ｒを含んでよい。他の例では、変異体ｆＨｂｐは、さらに、ｆＨｂｐＩＤ１に対して、Ｒ４１ＳまたはＲ４１Ａの置換及びＨ２４８Ｌの置換を含んでよい。ある例では、変異体ｆＨｂｐは、本明細書に開示の置換の２つ、３つ、またはそれより多くを含んでよい。特定の例では、変異体ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐＩＤ１に対して、置換Ｓ２２３Ｒ及びＨ２４８Ｌを含んでよい。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の２５％以下の親和性でヒトｆＨに結合する。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の１０％以下の親和性でヒトｆＨに結合する。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ１の親和性の５％以下の親和性でヒトｆＨに結合する。
【０００８】
本開示は、ｆＨｂｐＩＤ２２の変異体を提供する。本開示は、ｆＨｂｐの変異体であって：（ａ）アミノ酸１１５のアスパラギンに対するイソロイシン置換（Ｎ１１５Ｉ）；（ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸に対するグリシン置換（Ｄ１２１Ｇ）；（ｃ）アミノ酸１２８のセリンに対するトレオニン置換（Ｓ１２８Ｔ）；（ｄ）位置１３１のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；（ｅ）位置２１９のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；（ｆ）位置２２０のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む変異体を提供するとともに、該アミノ酸置換は、ｆＨｂｐＩＤ２２（配列番号２）に対するものであり、該変異体は、配列番号２と８５％より高いアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、該変異体ｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の５０％以下の親和性で結合し、該変異体は、哺乳類宿主において殺菌性抗体反応を誘導する。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の２５％以下の親和性でヒトｆＨに結合する。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の１０％以下の親和性でヒトｆＨに結合する。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の５％以下の親和性でヒトｆＨに結合する。一部の例では、Ｖ１３１でのアミノ酸置換は、Ｖ１３１Ｄ、Ｖ１３１Ｅ、Ｖ１３１Ｋ、Ｖ１３１Ｒ、Ｖ１３１Ｈ、Ｖ１３１Ｆ、Ｖ１３１Ｙ、またはＶ１３１Ｗである。一部の例では、Ｋ２１９でのアミノ酸置換は、Ｋ２１９Ｎ、Ｋ２１９Ｑ、Ｋ２１９Ｄ、Ｋ２１９Ｅ、Ｋ２１９Ｆ、Ｋ２１９Ｙ、またはＫ２１９Ｗである。一部の例では、Ｇ２２０でのアミノ酸置換は、Ｇ２２０Ｓ、Ｇ２２０Ｎ、Ｇ２２０Ｑ、Ｇ２２０Ｄ、Ｇ２２０Ｅ、Ｇ２２０Ｋ、Ｇ２２０Ｒ、Ｇ２２０Ｈ、Ｇ２２０Ｆ、Ｇ２２０Ｙ、またはＧ２２０Ｗである。
【０００９】
一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、野生型（ＷＴ）ｆＨｂｐ、例えば、ＷＴｆＨｂｐＩＤ２２の熱安定性と比較して該変異体ｆＨｂｐの熱安定性を高める二重変異を含む。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、ｆＨｂｐＩＤ２２（配列番号２）に対してＬ１３０Ｒ及びＧ１３３Ｄの置換を含んでよく、該変異体ｆＨｂｐは、配列番号２と８５％より高いアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、該変異体ｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の５０％以下の親和性で結合し、該変異体は、哺乳類宿主において殺菌性抗体反応を誘導し、該変異体は、ｆＨｂｐＩＤ２２の熱安定性と比較して高い熱安定性を有する。一部の例では、変異体ｆＨｂｐは、置換の組合せ、例えば、Ｌ１３０Ｒ、Ｇ１３３Ｄ、並びに：（ａ）Ｎ１１５Ｉ；（ｂ）Ｄ１２１Ｇ；（ｃ）Ｓ１２８Ｔ；（ｄ）Ｖ１３１；（ｅ）Ｋ２１９（例えば、Ｋ２１９Ｎ）；及び（ｆ）Ｇ２２０（例えば、Ｇ２２０Ｓ）から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでよいとともに、該アミノ酸置換は、ｆＨｂｐＩＤ２２（配列番号２）に対するものであり、該変異体ｆＨｂｐは、配列番号２と８５％より高いアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、該変異体ｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の５０％以下の親和性で結合し、該変異体は、哺乳類宿主において殺菌性抗体反応を誘導する。変異体ｆＨｂｐの熱安定性は、ＷＴｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐＩＤ２２）より、少なくとも５℃、１０℃、１５℃、２０℃、またはそれより高い、例えば、５℃～３０℃、５℃～２５℃、５℃～２０℃、１０℃～２０℃、もしくは１５℃～２０℃高いことがある。本明細書で用いられる「熱安定性」は、高温にさらされた場合のタンパク質の安定性を指し；熱安定性変異体タンパク質は、その立体構造を野生型タンパク質より高温で維持する。例えば、野生型（ＷＴ）ｆＨｂｐ、例えば、ＷＴｆＨｂｐＩＤ２２の熱安定性と比較して熱安定性を高める二重変異を含む変異体ｆＨｂｐは、ＷＴｆＨｂｐと比較して高温で変性しうる。ある例では、変異体ｆＨｂｐのＮ末端ドメインは、ＷＴｆＨｂｐ（例えば、ｆＨｂｐＩＤ２２）のＮ末端ドメインより高温で変性しうる。
【００１０】
ＷＴｆＨｂｐと比較して熱安定性を高める変異を含み、さらに、ｆＨの結合を低減することが知られるさらなる変異、例えば、ＵＳ２０１１／０２５６１８０に開示の変異を含むｆＨｂｐ変異体もまた本明細書に開示する。ある実施形態では、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨｂｐ）の変異体を開示するとともに、該変異体は、ｆＨｂｐＩＤ２２（配列番号２）に対して、アミノ酸置換Ｌ１３０Ｒ及びＧ１３３Ｄ、並びに置換Ｒ８０Ａ、Ｄ２１１Ａ、Ｅ２１８Ａ、Ｅ２４８Ａ、Ｇ２３６Ｉ、Ｔ２２１Ａ、及びＨ２２３Ａのうちの少なくとも１つを含み、該変異体は、配列番号２と８５％より高いアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、該変異体ｆＨｂｐは、ヒトＨ因子（ｆＨ）と、ヒトｆＨに対するｆＨｂｐＩＤ２２の親和性の５０％以下の親和性で結合し、該変異体は、哺乳類宿主において殺菌性抗体反応を誘導する。
（【００１１】以降は省略されています）

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