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公開番号2025075582
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-15
出願番号2023186863
出願日2023-10-31
発明の名称化合物、リゾチームの酵素活性の測定方法及び化合物の製造方法
出願人国立大学法人福島大学,株式会社コガネイ
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07H 5/06 20060101AFI20250508BHJP(有機化学)
要約【課題】水に対する溶解度が高く、リゾチームの活性測定感度の高い基質である化合物、リゾチームの酵素活性の測定方法及び化合物の製造方法の提供。
【解決手段】2～5分子のN-アセチルグルコサミンからなるキチンオリゴ糖と、2分子のグルコースからなる二糖が結合している構造を含む、化合物。前記二糖は、トレハロース、コージビオース、ソホロース、ニゲロース、ラミナリビオース、マルトース、セロビオース、イソマルトース及びゲンチオビオースから選択される1種である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
２～５分子のＮ－アセチルグルコサミンからなるキチンオリゴ糖と、２分子のグルコースからなる二糖が結合している構造を含む、化合物。
続きを表示（約 550 文字）【請求項２】
前記二糖が、トレハロース、コージビオース、ソホロース、ニゲロース、ラミナリビオース、マルトース、セロビオース、イソマルトース及びゲンチオビオースから選択される１種の二糖である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
リゾチームの酵素活性測定用の基質として使用される、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
リゾチームを含み得る検体と、請求項１又は２に記載の化合物と、を混合し、前記化合物をリゾチームによって分解させ、遊離した前記二糖を生成させる工程を含む、リゾチームの酵素活性の測定方法。
【請求項５】
前記二糖を生成させる工程において、生成された前記二糖をグルコシダーゼと接触させ、前記二糖を２分子のグルコースへ分解する、請求項４に記載のリゾチームの酵素活性の測定方法。
【請求項６】
前記二糖を生成させる工程によって生成された前記グルコースを定量する工程をさらに有する、請求項５に記載のリゾチームの酵素活性の測定方法。
【請求項７】
キチンオリゴ糖と前記二糖との混合物にリゾチームを添加することと、得られた反応物を精製し請求項１又は２に記載の化合物を得ることを含む、化合物の製造方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物、リゾチームの酵素活性の測定方法及び化合物の製造方法に関する。
続きを表示（約 1,700 文字）【背景技術】
【０００２】
血清及び尿中のリゾチーム活性の測定は、臨床診断において重要な意義を有している。例えば、潰瘍性大腸炎、肝疾患及び単球性白血病などの診断において、リゾチーム活性測定が利用されている。
【０００３】
糖質加水分解酵素ファミリー２２に分類されるリゾチームは、ペプチドグリカンと呼ばれるＮ－アセチルムラミン酸（以降、ＭｕｒＮＡｃと記載することがある）と、Ｎ－アセチルグルコサミン（以降、ＧｌｃＮＡｃと記載することがある）が交互に重合した細菌細胞壁多糖や、β－１，４グリコシド結合を介してＧｌｃＮＡｃが結合したキチンを加水分解する。
【０００４】
これらのリゾチームの活性測定は、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓの細胞壁を基質として用いる比濁法によって行われている。しかしながら、基質である乾燥菌体の品質が一定ではないことや、活性測定時の反応液のイオン強度及び水素イオン濃度（つまりｐＨ）に測定値が大きく影響を受ける等の理由から、上述の比濁法では活性測定値にばらつきを生じやすい。
【０００５】
特許文献１は、ｐ－ニトロフェノール基（以降、ｐＮＰと記載することがある）をキチンオリゴ糖の還元末端に結合した糖誘導体をリゾチームの基質とし、触媒作用によって遊離した発色団を測定する方法を開示している。
【０００６】
特許文献２は、４－メチルウンベリフェロン基（以降、４ＭＵと記載することがある）を有する化合物をリゾチームの基質とし、リゾチーム力価測定を行うことを開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
特開昭６２－２７８９９９号公報
特開昭５８－０１５９９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１に開示される方法では、基質の水に対する溶解度が低いことや、発色団（つまりｐＮＰ）と尿等の検体サンプルとの発色波長とが近似していることから、リゾチームの活性測定感度が低い。また、特許文献２に開示される方法では、４ＭＵがｐＮＰと同様に水に対する溶解度が低いため活性測定感度が低く、さらにリゾチームの活性測定に蛍光光度計を用いる必要があるため汎用性に欠ける。
【０００９】
以上に鑑み、本発明は、水に対する溶解度が高く、リゾチームの活性測定感度の高い基質である化合物、リゾチームの酵素活性の測定方法及び化合物の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、以下の態様を包含する。
［１］２～５分子のＮ－アセチルグルコサミンからなるキチンオリゴ糖と、２分子のグルコースからなる二糖が結合している構造を含む、化合物。
［２］前記二糖が、トレハロース、コージビオース、ソホロース、ニゲロース、ラミナリビオース、マルトース、セロビオース、イソマルトース及びゲンチオビオースから選択される１種の二糖である、［１］に記載の化合物。
［３］リゾチームの酵素活性測定用の基質として使用される、［１］又は［２］に記載の化合物。
［４］リゾチームを含み得る検体と、［１］又は［２］に記載の化合物と、を混合し、前記化合物をリゾチームによって分解させ、遊離した前記二糖を生成させる工程を含む、リゾチームの酵素活性の測定方法。
［５］前記二糖を生成させる工程において、生成された前記二糖をグルコシダーゼと接触させ、前記二糖を２分子のグルコースへ分解する、［４］に記載のリゾチームの酵素活性の測定方法。
［６］前記二糖を生成させる工程によって生成された前記グルコースを定量する工程をさらに有する、［５］に記載のリゾチームの酵素活性の測定方法。
［７］キチンオリゴ糖と前記二糖との混合物にリゾチームを添加することと、得られた反応物を精製し［１］又は［２］に記載の化合物を得ることを含む、化合物の製造方法。
【発明の効果】
（【００１１】以降は省略されています）

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