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公開番号2025090024
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-16
出願番号2024209823
出願日2024-12-02
発明の名称HTLV-1がコードするTax抗原特異的細胞傷害性Tリンパ球のT細胞受容体又はその機能的断片
出願人学校法人順天堂,学校法人聖マリアンナ医科大学
代理人弁理士法人アルガ特許事務所
主分類C07K 14/725 20060101AFI20250609BHJP(有機化学)
要約【課題】Tax抗原特異的細胞傷害性Tリンパ球のT細胞受容体をクローニングし、優れた抗腫瘍効果を有するT細胞受容体又はその機能的断片を提供すること。
【解決手段】配列番号3で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に1～3個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖CDR3領域、及び配列番号8で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に1～3個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖CDR3領域を有する、HTLV-1がコードするTax抗原特異的細胞傷害性Tリンパ球のT細胞受容体又はその機能的断片。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号３で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域、及び配列番号８で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域を有する、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
続きを表示（約 1,000 文字）【請求項２】
配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域、及び配列番号８で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能性断片。
【請求項３】
さらに、配列番号１で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域、及び配列番号６で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
【請求項４】
さらに、配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域、及び配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
【請求項５】
さらに、配列番号２で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域、及び配列番号７で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｖ領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
【請求項６】
さらに、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域、及び配列番号７で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｖ領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
【請求項７】
さらに配列番号４で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｊ領域、及び配列番号９で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｊ領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
【請求項８】
さらに、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域、及び配列番号９で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｊ領域を有する、請求項１記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
【請求項９】
請求項１～８のいずれか1項に記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片を有する細胞。
【請求項１０】
Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞である請求項９記載の細胞。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片、及びその利用に関する。
続きを表示（約 5,400 文字）【背景技術】
【０００２】
成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ：ａｄｕｌｔＴ－ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ－ｌｙｍｐｈｏｍａ）は、ＨＴＬＶ－１（ｈｕｍａｎＴ－ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃｖｉｒｕｓｔｙｐｅ－Ｉ）というウイルス感染が原因で、ＣＤ４＋Ｔ細胞に感染し、感染したＴ細胞からがん化した細胞（ＡＴＬ細胞）が無制限に増殖することで発症する（非特許文献１）。ＨＴＬＶ－１は発がん作用を有するＴａｘというウイルスタンパク質の遺伝子を持っているが、このＴａｘ抗原をターゲットにしたＣＴＬ療法は有効な治療法と期待される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
国立感染症研究所ホームページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体をクローニングし、優れた抗腫瘍効果を有するＴ細胞受容体又はその機能的断片を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで本発明者は、患者末梢血から日本人に多いＨＬＡ－Ａ２４０２拘束性のＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導後、シングルセルクローニングを行い、Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のクローン樹立に成功した。そして、得られたクローンの自己腫瘍細胞（ＡＴＬ細胞）に対する抗腫瘍効果を確認した。しかしＣＴＬクローンは増殖力に限りがあり、実際の患者の治療に用いるための細胞を確保するのは難しいと考えた。そのため、ＣＴＬクローンを一度ｉＰＳ細胞に変換し、そのｉＰＳ細胞からＴａｘ抗原特異的ＣＴＬを再分化誘導したところ、もとのＣＴＬクローンよりも強力な抗腫瘍効果を持つＣＴＬの作製に成功した。
再分化誘導したＣＴＬをレパトア解析することにより、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアミノ酸配列を明らかにし、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、次の発明［１］～［２０］を提供するものである。
［１］配列番号３で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域、及び配列番号８で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域を有する、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［２］配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域、及び配列番号８で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域を有する、［１］記載のＴ細胞受容体又はその機能性断片。
［３］さらに、配列番号１で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域、及び配列番号６で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域を有する、［１］又は［２］記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［４］さらに、配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域、及び配列番号６で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域を有する、［１］又は［２］記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［５］さらに、配列番号２で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域、及び配列番号７で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｖ領域を有する、［１］～［４］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［６］さらに、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域、及び配列番号７で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｖ領域を有する、［１］～［４］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［７］さらに配列番号４で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｊ領域、及び配列番号９で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｊ領域を有する、［１］～［６］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［８］さらに、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域、及び配列番号９で示されるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｊ領域を有する、［１］～［６］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片。
［９］［１］～［８］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片を有する細胞。
［１０］Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞である［９］記載の細胞。
［１１］［１］～［８］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片を有するｉＰＳ細胞。
［１２］Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ－ｉＰＳ細胞である［１１］記載のｉＰＳ細胞。
［１３］［１］～［８］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片のＤＮＡを含むベクター。
［１４］［１］～［８］のいずれか１項に記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片を有するＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞又はＴ－ｉＰＳ細胞を含有する、医薬組成物。
［１５］成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫治療用医薬組成物である［１４］に記載の医薬組成物。
［１６］［１］～［８］のいずれかに記載のＴ細胞受容体又はその機能的断片を有するＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞を含有する、細胞性医薬品。
［１７］成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫治療用細胞性医薬品である［１６］に記載の細胞性医薬品。
［１８］表面抗原がＣＤ４－、ＣＤ８＋、ＰＤ－１－、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋又はＣＣＲ７＋であるＴ細胞を含むことを特徴とする、Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞又はＴ－ｉＰＳ細胞。
［１９］表面抗原がＣＤ４－、ＣＤ８＋、ＰＤ－１－、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋又はＣＣＲ７＋であるＴ細胞を含むことを特徴とする、Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞又はＴ－ｉＰＳ細胞を含む医薬組成物。
［２０］表面抗原がＣＤ４－、ＣＤ８＋、ＰＤ－１－、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋又はＣＣＲ７＋であるＴ細胞を含むことを特徴とする、Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞又はＴ－ｉＰＳ細胞を含む細胞性医薬品。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片を有するＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球は、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫治療薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
得られたＴリンパ球のＴａｘ抗原に対する抗原特異性を示す。
得られたもとのＴａｘ特異的ＣＴＬクローンとｉＰＳＣ由来Ｔａｘ特異的ＣＴＬの抗原特異的細胞傷害活性を示す。ａｕｔｏＡＴＬは、ＡＴＬに対する作用を示し、ＨＬＡｍｉｓｍａｔｃｈｅｄＬＣＬは、コントロールとしてＨＬＡの一致しないＬＣＬ細胞に対する作用を示す。
Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体のα鎖及びβ鎖のアミノ酸配列を示す。
Ｔａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体のα鎖及びβ鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の一態様は、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片であって、配列番号３で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号８で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域とを有することを特徴とする。
また、本発明の他の一態様は、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片であって、配列番号３で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号１で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域と、配列番号８で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号６で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域とを有することを特徴とする。
また、本発明の他の一態様は、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片であって、配列番号３で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号１で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域と、配列番号２で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域と、配列番号８で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号６で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域と、配列番号７で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｖ領域とを有することを特徴とする。
また、本発明の他の一態様は、ＨＴＬＶ－１がコードするＴａｘ抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球のＴ細胞受容体又はその機能的断片であって、配列番号３で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号１で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｌ領域と、配列番号４で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｊ領域と、配列番号２で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるα鎖Ｖ領域と、配列番号８で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖ＣＤＲ３領域と、配列番号６で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｌ領域と、配列番号７で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｖ領域と、配列番号９で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列に１～３個のアミノ酸が置換、欠失若しくは付加してなるアミノ酸配列からなるβ鎖Ｊ領域とを有することを特徴とする。
【００１０】
ＨＴＬＶ－１は、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡｄｕｌｔＴ－ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ：ＡＴＬ）、ＨＴＬＶ－１関連脊髄症（ＨＴＬＶ－１ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｙｅｌｏｐａｔｈｙ：ＨＡＭ）及びＨＴＬＶ－１ぶどう膜炎（ＨＴＬＶ－１ｕｖｅｉｔｉｓ：ＨＵ）などの疾患を引き起こす。ＨＴＬＶ－１は、長さ約９ｋｂのプロウイルス遺伝子を有する。ＨＴＬＶ－１のプロウイルス遺伝子は、Ｔａｘ、Ｒｅｘ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ等の種々のタンパク質をコードする。このうちＴａｘタンパク質は、完全長として約３５３アミノ酸残基を有し、宿主細胞内でＮＦ－κＢ、ＳＲＦ、ＣＲＥＢなどの宿主の転写因子の活性化、ｐ５３等のタンパク質の機能抑制など、多数の機能を有する。
また、ＨＴＬＶ－１の感染対象細胞のほとんどは、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
（【００１１】以降は省略されています）

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