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公開番号2025014677
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-30
出願番号2023117434
出願日2023-07-19
発明の名称血管平滑筋細胞指向カプシド、アデノ随伴ウイルスベクター、医薬組成物、治療方法、核酸導入方法、及びカプシド製造方法
出願人学校法人自治医科大学,国立大学法人群馬大学
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 15/864 20060101AFI20250123BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】血管平滑筋への感染率を高めた血管平滑筋細胞指向カプシドを提供する。
【解決手段】
アデノ随伴ウイルスのカプシドであり、血管平滑筋細胞への指向性因子が付加されたことを特徴とする。この指向性因子は、ウイルス粒子の表面に提示されるペプチドである。ペプチドは、マウス(Mus musculus)の血管平滑筋細胞を感染対象とする場合、「RENKLGE」「KDTVPRE」「TETGKTA」「STPAAKE」「RNREPTE」「ARNGTTE」「KDTAERQ」「NRGGNQD」「NRPDTNS」「TRATSQE」のいずれかを含む。ヒト(Homo sapiens)の血管平滑筋細胞を感染対象とする場合、「NRPETNP」「SHDPSKE」「SEIRRDQ」「NRNKHEE」「RQDNKME」「THPPAPQ」「TRGGGSE」「TEKQTNS」「RVTMGSE」「ATKNQNE」のいずれかを含む。
【選択図】図4
特許請求の範囲【請求項１】
アデノ随伴ウイルスのカプシドであって、
血管平滑筋細胞への指向性因子が付加された
ことを特徴とする血管平滑筋細胞指向カプシド。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
前記指向性因子は、ウイルス粒子の表面に提示されるペプチドである
ことを特徴とする請求項１に記載の血管平滑筋細胞指向カプシド。
【請求項３】
前記ペプチドは、マウス（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）の血管平滑筋細胞を感染対象とする場合、「ＲＥＮＫＬＧＥ」（配列番号５）、「ＫＤＴＶＰＲＥ」（配列番号６）、「ＴＥＴＧＫＴＡ」（配列番号７）、「ＳＴＰＡＡＫＥ」（配列番号８）、「ＲＮＲＥＰＴＥ」（配列番号９）、「ＡＲＮＧＴＴＥ」（配列番号１０）、「ＫＤＴＡＥＲＱ」（配列番号１１）、「ＮＲＧＧＮＱＤ」（配列番号１２）、「ＮＲＰＤＴＮＳ」（配列番号１３）、及び「ＴＲＡＴＳＱＥ」（配列番号１４）のアミノ酸配列のいずれかを含む
ことを特徴とする請求項２に記載の血管平滑筋細胞指向カプシド。
【請求項４】
前記ペプチドは、ヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）の血管平滑筋細胞を感染対象とする場合、「ＮＲＰＥＴＮＰ」（配列番号１５）、「ＳＨＤＰＳＫＥ」（配列番号１６）、「ＳＥＩＲＲＤＱ」（配列番号１７）、「ＮＲＮＫＨＥＥ」（配列番号１８）、「ＲＱＤＮＫＭＥ」（配列番号１９）、「ＴＨＰＰＡＰＱ」（配列番号２０）、「ＴＲＧＧＧＳＥ」（配列番号２１）、「ＴＥＫＱＴＮＳ」（配列番号２２）、「ＲＶＴＭＧＳＥ」（配列番号２３）、「ＡＴＫＮＱＮＥ」（配列番号２４）のアミノ酸配列のいずれかを含む
ことを特徴とする請求項２に記載の血管平滑筋細胞指向カプシド。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載の血管平滑筋細胞指向カプシドを備える
ことを特徴とするアデノ随伴ウイルスベクター。
【請求項６】
請求項１乃至４のいずれかに記載の血管平滑筋細胞指向カプシドを備える
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項７】
病気の治療用の組成物が含まれる請求項１乃至４のいずれかに記載の血管平滑筋細胞指向カプシドである
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
動物の治療方法であって、
請求項１乃至４のいずれかに記載の血管平滑筋細胞指向カプシドにより治療用の組成物を前記血管平滑筋細胞に導入する
ことを特徴とする治療方法。
【請求項９】
請求項５に記載のアデノ随伴ウイルスベクターにより、核酸分子を前記血管平滑筋細胞に導入する
ことを特徴とする核酸導入方法。
【請求項１０】
アデノ随伴ウイルスのカプシド製造方法であって、
血管平滑筋細胞への指向性因子を付加する
ことを特徴とするカプシド製造方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管平滑筋細胞を指向するアデノ随伴ウイルスの血管平滑筋細胞指向カプシド、アデノ随伴ウイルスベクター、医薬組成物、治療方法、核酸導入方法、及びカプシド製造方法に関する。
続きを表示（約 2,700 文字）【背景技術】
【０００２】
アデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ。以下、「ＡＡＶ」という。）は１９６５年の発見以来、病原性がないウイルスとして存在が知られてきた。ＡＡＶは、単独での増殖能力がなく、アデノウイルスやヘルペスウイルス等に依存して宿主細胞内で増殖が可能となるウイルスであり、ヒトにおける病原性を示す報告はない。このため、近年では、ＡＡＶは、病原性がないため安全な遺伝子導入のツールとして、遺伝子治療や再生医療においての活用が期待されている。
従来、１００種類以上の野生型のＡＡＶが同定されている。これらのＡＡＶは、最表面を構成する外被タンパク質（以下、「カプシド」という。）のアミノ酸配列が、それぞれ異なっている。このカプシドのアミノ酸配列の相違が、それぞれのＡＡＶの臓器、細胞種への感染特異性（以下、「指向性（Ｔｒｏｐｉｓｍ）」という。）に関連している。
【０００３】
特許文献１を参照すると、親ＡＡＶカプシドタンパク質に対して１つ以上の修飾をアミノ酸配列に有し、ＡＡＶビリオン中に存在する場合、未修飾の親ＡＡＶカプシドタンパク質を含むＡＡＶビリオンによる筋肉細胞の感染性と比較して増加した１種以上の筋肉細胞の感染性をもたらすＡＡＶのカプシドタンパク質が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
特表２０２０－５３７５０８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献１に記載のカプシドタンパク質を用いたＡＡＶは、骨格筋については感染性を高めているものの、血管平滑筋への感染率は十分ではなかった。
【０００６】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、上述の課題を解消することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の血管平滑筋細胞指向カプシドは、アデノ随伴ウイルスのカプシドであって、血管平滑筋細胞への指向性因子が付加されたことを特徴とする。
本発明の血管平滑筋細胞指向カプシドは、前記指向性因子は、ウイルス粒子の表面に提示されるペプチドであることを特徴とする。
本発明の血管平滑筋細胞指向カプシドは、前記ペプチドは、マウス（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）の血管平滑筋細胞を感染対象とする場合、「ＲＥＮＫＬＧＥ」（配列番号５）、「ＫＤＴＶＰＲＥ」（配列番号６）、「ＴＥＴＧＫＴＡ」（配列番号７）、「ＳＴＰＡＡＫＥ」（配列番号８）、「ＲＮＲＥＰＴＥ」（配列番号９）、「ＡＲＮＧＴＴＥ」（配列番号１０）、「ＫＤＴＡＥＲＱ」（配列番号１１）、「ＮＲＧＧＮＱＤ」（配列番号１２）、「ＮＲＰＤＴＮＳ」（配列番号１３）、及び「ＴＲＡＴＳＱＥ」（配列番号１４）のアミノ酸配列のいずれかを含むことを特徴とする。
本発明の血管平滑筋細胞指向カプシドは、前記ペプチドは、ヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）の血管平滑筋細胞を感染対象とする場合、「ＮＲＰＥＴＮＰ」（配列番号１５）、「ＳＨＤＰＳＫＥ」（配列番号１６）、「ＳＥＩＲＲＤＱ」（配列番号１７）、「ＮＲＮＫＨＥＥ」（配列番号１８）、「ＲＱＤＮＫＭＥ」（配列番号１９）、「ＴＨＰＰＡＰＱ」（配列番号２０）、「ＴＲＧＧＧＳＥ」（配列番号２１）、「ＴＥＫＱＴＮＳ」（配列番号２２）、「ＲＶＴＭＧＳＥ」（配列番号２３）、「ＡＴＫＮＱＮＥ」（配列番号２４）のアミノ酸配列のいずれかを含むことを特徴とする。
本発明のアデノ随伴ウイルスベクターは、前記血管平滑筋細胞指向カプシドを備えることを特徴とする。
本発明の医薬組成物は、前記血管平滑筋細胞指向カプシドを備えることを特徴とする。
本発明の医薬組成物は、病気の治療用の組成物が含まれる前記血管平滑筋細胞指向カプシドであることを特徴とする。
本発明の治療方法は、動物の治療方法であって、前記血管平滑筋細胞指向カプシドにより治療用の組成物を前記血管平滑筋細胞に導入することを特徴とする。
本発明の核酸導入方法は、前記アデノ随伴ウイルスベクターにより、核酸分子を前記血管平滑筋細胞に導入することを特徴とする。
本発明のカプシド製造方法は、アデノ随伴ウイルスのカプシド製造方法であって、血管平滑筋細胞への指向性因子を付加することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、血管平滑筋細胞への指向性因子が付加されたことで、血管平滑筋への感染率を従来より高めたＡＡＶを製造可能な血管平滑筋細胞指向カプシドを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
本発明の実施例に係る血管平滑筋指向性ＡＡＶの作製方法の概念図である。
本発明の実施例に係るＡＡＶのカプシド以外プラスミドの構造を示す概念図である。
本発明の実施例に係るＡＡＶの配列付加カプシドプラスミドの構造を示す概念図である。
本発明の実施例に係るマウス大動脈平滑筋細胞でのスクリーニング結果を示す写真及びグラフである。
本発明の実施例に係るヒト脳小血管平滑筋細胞でのスクリーニング結果を示す写真及びグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
＜実施の形態＞
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、長期に安全な遺伝子導入を可能とする。これは、病原性がなく、宿主ゲノムへの組み込みが少ない等の特徴があるためである。また、ＡＡＶベクターは、ヘルパーウイルスの非存在下では増殖しないため、分裂が盛んな細胞では細胞あたりの導入遺伝子コピー数が次第に低下する点も安全性に資する。加えて、ＡＡＶベクターは、長期保存可能であり、分裂細胞、非分裂細胞ともに高効率の遺伝子導入が可能であるという特徴も備えている。
一方、近年、脳小血管病等を含む幅広い疾患において、血管平滑筋に特異的な遺伝子治療の必用性が増している。しかしながら、従来、血管平滑筋への明らかな指向性を持つＡＡＶは存在しなかった。すなわち、従来のＡＡＶベクターは、血管平滑筋への遺伝子導入効率は高いとは言えなかった。さらに、血管平滑筋への遺伝子導入を目指したＡＡＶベクターは、開発されていなかった。
（【００１１】以降は省略されています）

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