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公開番号2024163613
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-11-22
出願番号2023079377
出願日2023-05-12
発明の名称ポリフェノールの分析方法
出願人株式会社島津製作所
代理人個人,個人
主分類G01N 30/88 20060101AFI20241115BHJP(測定;試験)
要約【課題】複数種のカテキン類およびテアフラビン類を短時間で一斉分析できる方法を提供する。
【解決手段】ポリフェノールを含有する試料を、液体クロマトグラフィーにより分離する分離工程と、分離した試料を、質量分析法により測定する測定工程とを順に備える。分離工程では、液体クロマトグラフのカラムとして、ペンタフルオロフェニルプロピル基を有する充填剤が充填されたカラムを用いる。測定工程では、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、エピカテキン3-(3´´-O-メチル)ガレート、エピガロカテキン3-(3´´-O-メチル)ガレート、テアフラビン、テアフラビン3-O-ガレート、テアフラビン3´-O-ガレートおよびテアフラビン3,3´-ジガレートに由来するイオンを測定する。
【選択図】図2
特許請求の範囲【請求項１】
ポリフェノールを液体クロマトグラフィー質量分析法により分析する方法であって、
ポリフェノールを含有する試料を、液体クロマトグラフィーにより分離する分離工程と、
分離した前記試料を、質量分析法により測定する測定工程とを順に備え、
前記分離工程では、液体クロマトグラフのカラムとして、ペンタフルオロフェニルプロピル基を有する充填剤が充填されたカラムを用い、
前記測定工程では、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、エピカテキン３－（３´´－Ｏ－メチル）ガレート、エピガロカテキン３－（３´´－Ｏ－メチル）ガレート、テアフラビン、テアフラビン３－Ｏ－ガレート、テアフラビン３´－Ｏ－ガレートおよびテアフラビン３，３´－ジガレートに由来するイオンを測定する、ポリフェノールの分析方法。
続きを表示（約 270 文字）【請求項２】
分離工程において、移動相における有機溶媒濃度を増加させる、請求項１に記載の分析方法。
【請求項３】
分離工程開始から所定時間経過した後に、移動相における有機溶媒濃度の増加割合を遅くする、請求項２に記載の分析方法。
【請求項４】
前記液体クロマトグラフィー質量分析法は、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法である、請求項１に記載の分析方法。
【請求項５】
前記ポリフェノールに由来するイオンに加えて、一次代謝物に由来するイオンを測定する、請求項１に記載の分析方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリフェノールの分析方法に関する。
続きを表示（約 2,100 文字）【背景技術】
【０００２】
緑茶に含まれるポリフェノールの一種であるカテキン類には、生体に対する抗酸化作用、血統上昇抑制作用、コレステロール吸収抑制作用があることが報告されている。また、緑茶を発酵させた紅茶には、カテキン類以外のポリフェノールとして、テアフラビン類が豊富に含まれ、テアフラビン類には、抗ウィルス活性があると報告されている。これら茶に含まれるカテキン類およびテアフラビン類は、種々存在し、具体的には、カテキン類としては、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、エピカテキン３－（３´´－Ｏ－メチル）ガレート、エピガロカテキン３－（３´´－Ｏ－メチル）ガレート、などの少なくとも１０種類が知られており、テアフラビン類としては、テアフラビン、テアフラビン３－Ｏ－ガレート、テアフラビン３´－Ｏ－ガレートおよびテアフラビン３，３´－ジガレートの少なくとも４種類が知られている。これらのカテキン類およびテアフラビン類の機能などを詳細に把握するには、茶に含まれるこれらの有無を分析することは重要である。
【０００３】
ところで、複数種のカテキン類およびテアフラビン類を一斉分析する方法としては、液体クロマトグラフィー法、液体クロマトグラフィー質量分析法などが知られている（非特許文献１～３参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
「茶葉に含まれるカテキン類の定量分析」、https://www.naro.go.jp/laboratory/nfri/contens/files/l583.pdf、［令和５年４月１７日検索］、インターネット
「トリプル四重極型ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いたお茶中のカテキン類／テアフラビン類一斉分析」、https://www.an.shimadzu.co.jp/aplnotes/lcms/an_01-00034-jp.pdf、［令和５年４月１７日検索］、インターネット
「ＬＣとＬＣ／ＭＳの知恵」、第4号、6-13(2022)、 https://www.lckon.org/_userdata/journal_004_202206.pdf、［令和５年４月１７日検索］、インターネット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、いずれの方法でも、上記１０種のカテキン類および４種のテアフラビン類の１４成分の全てを一斉分析することは達成できていない。また、分析時間においてもいずれの方法も１５分以上と長く、より短い時間、例えば１０分未満での分析完了が求められている。
【０００６】
したがって、本発明は、複数種のカテキン類およびテアフラビン類を短時間で一斉分析できる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様の分析方法は、ポリフェノールを液体クロマトグラフィー質量分析法により分析する方法であって、ポリフェノールを含有する試料を、液体クロマトグラフィーにより分離する分離工程と、分離した前記試料を、質量分析法により測定する測定工程とを順に備え、前記分離工程では、液体クロマトグラフのカラムとして、ペンタフルオロフェニルプロピル基を有する充填剤が充填されたカラムを用い、前記測定工程では、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、エピカテキン３－（３´´－Ｏ－メチル）ガレート、エピガロカテキン３－（３´´－Ｏ－メチル）ガレート、テアフラビン、テアフラビン３－Ｏ－ガレート、テアフラビン３´－Ｏ－ガレートおよびテアフラビン３，３´－ジガレートに由来するイオンを測定する。
【発明の効果】
【０００８】
第１の態様の分析方法によれば、１０種類のカテキン類および４種類のテアフラビン類を短時間で一斉分析することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
図１は、実施例１において、固定相におけるＡ液とＢ液との混合割合を示したグラフであり、横軸が時間、縦軸が固定相におけるＢ液の混合割合を示す。
図２は、実施例１における１４成分のマスクロマトグラムを合わせたマスクロマトグラムであって、横軸が保持時間、縦軸がピーク強度を示す。
図３は、実施例２におけるウーロン茶に含まれる成分のマスクロマトグラムを合わせたマスクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
１．第１の実施形態
本発明の第１の実施形態の分析方法は、ポリフェノールを含有する試料を液体クロマトグラフィー質量分析法により分析する方法であって、用意工程、分離工程および測定工程を順に備える。以下、各工程を詳述する。
（【００１１】以降は省略されています）

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