特許ウォッチ

公開番号2024122980
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-09-10
出願番号2024080086,2021520278
出願日2024-05-16,2019-06-20
発明の名称インターロイキン-2バリアントおよびその使用方法
出願人キュージーンインコーポレイテッド,CUGENE INC.
代理人弁理士法人北青山インターナショナル
主分類C07K 19/00 20060101AFI20240903BHJP(有機化学)
要約【課題】自己免疫疾患、臓器移植の拒絶反応または関連する移植片対宿主病(GvHD)、炎症性疾患、関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、アトピー性皮膚炎、糖尿病、および免疫関連有害事象(irAE)の治療に用いるための、融合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。
【解決手段】1)IL-2バリアントポリペプチドと、2)Fcドメインとを含む単離された融合タンパク質であって、前記融合タンパク質が、二量体形態であり、前記融合タンパク質の前記IL-2バリアントポリペプチドの各々が、ペプチドリンカーによって前記Fcドメインに融合していることを特徴とする単離された融合タンパク質、前記単離された融合タンパク質を、薬剤的に許容できる担体と混合して含む、医薬組成物を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
単離されたインターロイキン－２（ＩＬ－２）バリアントポリペプチドであって、Ｌ１９位、Ｄ２０位、Ｌ２１位、Ｑ２２位、Ｒ３８位、Ｆ４２位、Ｎ８８位、Ｓ１２５位、またはＱ１２６位のアミノ酸残基のうちの１または複数が別のアミノ酸と置換されている配列番号３のアミノ酸配列を含み、配列番号３によって示されるポリペプチドと比較してＩＬ－２Ｒβγ受容体複合体を活性化する能力は低減されているが、ＩＬ－２Ｒαβγ受容体複合体を活性化する能力は保持されている、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
続きを表示（約 1,600 文字）【請求項２】
前記アミノ酸置換が、配列番号３の、１９位におけるＬ１９Ｄ置換、Ｌ１９Ｈ置換、Ｌ１９Ｎ置換、Ｌ１９Ｒ置換、Ｌ１９Ｓ置換、Ｌ１９Ｐ置換、およびＬ１９Ｙ置換、２０位におけるＤ２０Ｅ置換、Ｄ２０Ｉ置換、Ｄ２０Ｎ置換、Ｄ２０Ｑ置換、Ｄ２０Ｓ置換、Ｄ２０Ｔ置換、およびＤ２０Ｙ置換、２１位におけるＬ２１Ｓ置換、Ｌ２１Ｒ置換、およびＬ２１Ｎ置換、２２位におけるＱ２２Ｎ置換、Ｑ２２Ｈ置換、Ｑ２２Ｋ置換、Ｑ２２Ｙ置換、Ｑ２２Ｉ置換、８８位におけるＮ８８Ｅ置換、Ｎ８８Ｇ置換、Ｎ８８Ｔ置換、Ｎ８８Ｍ置換、Ｎ８８Ｑ置換、Ｎ８８Ｒ置換、およびＮ８８Ｉ置換、１２５位におけるＳ１２５Ｅ置換、Ｓ１２５Ｋ置換、Ｓ１２５Ｈ置換、Ｓ１２５Ｗ置換、およびＳ１２５Ｉ置換、並びに１２６位におけるＱ１２６Ｄ置換、Ｑ１２６Ｅ置換、Ｑ１２６Ｈ置換、Ｑ１２６Ｋ置換、Ｑ１２６Ｌ置換、Ｑ１２６Ｍ置換、Ｑ１２６Ｎ置換、およびＱ１２６Ｙ置換からなる群から選択される、またはこれらの置換の任意の組み合わせである、請求項１に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項３】
配列番号３のＬ１９位およびＱ１２６位のアミノ酸残基に２つのアミノ酸置換を含む、請求項１および２のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項４】
配列番号３のＬ１９位、Ｓ１２５位、およびＱ１２６位のアミノ酸残基に３つのアミノ酸置換を含む、請求項１および２のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項５】
前記アミノ酸置換が、配列番号３の、１９位におけるＬ１９Ｄ置換、Ｌ１９Ｈ置換、Ｌ１９Ｎ置換、Ｌ１９Ｒ置換、Ｌ１９Ｓ置換、Ｌ１９Ｐ置換、およびＬ１９Ｙ置換、１２５位におけるＳ１２５Ｅ置換、Ｓ１２５Ｋ置換、Ｓ１２５Ｈ置換、Ｓ１２５Ｗ置換、およびＳ１２５Ｉ置換、並びに１２６位におけるＱ１２６Ｄ置換、Ｑ１２６Ｅ置換、Ｑ１２６Ｈ置換、Ｑ１２６Ｋ置換、Ｑ１２６Ｌ置換、Ｑ１２６Ｍ置換、Ｑ１２６Ｎ置換、およびＱ１２６Ｙ置換からなる群から選択される、請求項３および４のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項６】
配列番号４～４３、１０８～１４６、および１９３～１９７に記載のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項７】
配列番号５～１４、２６～４３、１０８～１１１、１２５～１４６、および１９３～１９７（をＩＬ－２バリアントは含む）に記載のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項８】
単離されたＩＬ－２バリアントポリペプチドであって、配列番号３に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号３によって示されるポリペプチドと比較してＩＬ－２Ｒβγ受容体複合体を活性化する能力は低減されているが、ＩＬ－２Ｒαβγ受容体複合体を活性化する能力は保持されている、ＩＬ－２バリアントポリペプチド。
【請求項９】
１）請求項１～８のいずれか一項に記載のＩＬ－２バリアントポリペプチドと、２）異種タンパク質と、を含む、単離された融合タンパク質。
【請求項１０】
前記ＩＬ－２バリアントポリペプチドが、そのＮ末端アミノ酸において、前記異種タンパク質のＣ末端アミノ酸に、所望によりペプチドリンカーを介して融合している、請求項９に記載の単離された融合タンパク質。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連特許出願
本出願は２０１８年１１月２日に出願された米国仮出願第６２／７５５，０１６号、および２０１８年６月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／６８９，０５５号の利益を主張するものであり、当該仮特許出願の全内容は参照により本明細書に援用される。
続きを表示（約 4,100 文字）【背景技術】
【０００２】
インターロイキン２（ＩＬ－２）はＴ細胞に関連して記述がなされた最初の増殖因子である。その発見以後、ＩＬ－２は、インビトロにおいてはＴ細胞の増殖および生存を促進することが示され（Ｓｍｉｔｈ、ＫＡ．（１９８８年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ．、２４０巻、頁１１６９－７６）、Ｔ細胞性ウイルス感染（Ｔｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）（Ｂｌａｔｔｍａｎ、ＪＮら（２００３年）、ＮａｔＭｅｄ、９巻、頁５４０－７）やワクチン（Ｆｉｓｈｍａｎ、Ｍ．ら（２００８年）、ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３１巻、頁７２－８０、Ｋｕｄｏ－Ｓａｉｔｏ、Ｃ．ら（２００７年）、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、５６巻、頁１８９７－９１０；Ｌｉｎ、ＣＴ．ら（２００７年）、ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ．、１１４巻、頁８６－９３）との関連においては免疫応答をブーストする能力が示されている。
【０００３】
ＩＬ－２はがん治療で用いられている。組換えヒトＩＬ－２は転移性黒色腫および腎がんに対する効果の高い免疫療法であり、およそ１０％の患者で持続的な反応が見られる。しかし、半減期が短く、毒性が強いことで、ＩＬ－２の最適用量は制限を受けている。さらに、ＩＬ－２は、そのヘテロ三量体型受容体のＩＬ－２Ｒαβγに対して、より大きな親和性で結合するため、高レベルのＩＬ－２Ｒαを恒常的に発現している免疫抑制的な制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の優先的な増殖が起こる。Ｔｒｅｇの増殖はがん免疫療法にとってのＩＬ－２の望ましくない効果となる。しかし、低用量でもＴｒｅｇ細胞を刺激できるＩＬ－２の能力は、自己免疫性障害および種々の炎症性障害の治療で利用できる可能性があった。
【０００４】
Ｔｒｅｇは免疫系恒常性の中心となり、（自己反応性）エフェクターＴ細胞を抑制することにより末梢性免疫寛容の維持で主要な役割を担っている。複数の自己免疫性疾患および炎症性疾患において、Ｔｒｅｇ細胞数またはＴｒｅｇ機能の欠損が示された。結果として、Ｔｒｅｇ細胞の数および／または機能を増強する治療法の開発には大きな関心が寄せられている。検討中の自己免疫疾患に対する１つの治療アプローチは、Ｔｒｅｇ細胞のターゲティングのために低用量のＩＬ－２を用いるものであるが、これは、Ｔｒｅｇ細胞が、ＩＬ－２Ｒαレベルが恒常的に高いために、より低濃度のＩＬ－２に多くの他の免疫細胞種よりも応答するためである（ＫｌａｔｚｍａｎｎＤ、２０１５年、ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．、１５巻：頁２８３－９４）。種々のＧｖＨＤ患者（Ｋｏｒｅｔｈ、Ｊ．ら、２０１１年、ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．、３６５巻：頁２０５５－６６）およびＨＣＶ関連自己免疫性脈管炎患者（Ｓａａｄｏｕｍ、Ｄ．ら、２０１１年、ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．、３６５巻：頁２０６７－７７）の、低用量ＩＬ－２による治療の臨床試験は、Ｔｒｅｇレベルの増加と臨床効果の兆候を示した。しかし、これらの低い用量においても、安全性および忍容性において深刻な問題が生じた。以上のことから、ＩＬ－２よりも特異的にＴｒｅｇ細胞を標的とする、Ｔｒｅｇ細胞の数および機能を増強できる、効果的な自己免疫性／炎症性疾患治療が求められている。
【０００５】
さらに最近になって、細胞傷害性のエフェクターＴ細胞またはＴｒｅｇ細胞のどちらかを選択的に刺激するよう、ＩＬ－２を改変できることが分かった。様々なアプローチにより、免疫刺激能が改善され選択的となったＩＬ－２バリアントが作製された（例えば、米国特許第７，１８６，８０４号、米国特許第７，１０５，６５３号、米国特許第６，９５５，８０７号、米国特許第５，２２９，１０９号、米国特許出願公開第２００５０１４２１０６号を参照）。本発明においては、この分子の、主に高親和性の受容体（α鎖、β鎖、およびγ鎖）によりシグナル伝達する能力を増強し、中間親和性の受容体（β鎖およびγ鎖）によりシグナル伝達する能力は増強しないように、ＩＬ－２バリアントの設計を行った。基本的な考え方としては、確認された毒性作用の原因であると考えられた、エフェクターＴ細胞およびＮＫ細胞におけるシグナル伝達は促進せずに、Ｔｒｅｇ細胞におけるシグナル伝達を促進することとした。重要なこととして、天然の調節性Ｔ細胞を刺激する能力に基づいて、インビボにおいてネイティブＩＬ－２よりも大きな治療効果を有するＩＬ－２バリアントに関する先行技術の開示はない。しかし、ＩＬ－２バリアントの初期の研究以後、この分野の研究によって、Ｔｒｅｇ細胞が、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）を、ＩＬ－２Ｒβおよびγｃと共に恒常的に高発現していることの、より完全な証明がなされ、ＩＬ－２Ｒαβγ選択的アゴニストとしてのＩＬ－２バリアントはＴｒｅｇ細胞に対し選択的であるはずである。
【０００６】
要約すると、ＩＬ－２は、様々な細胞集団の生物活性に非常に関りがある、高度に多面的なサイトカインである。この特性は、ＩＬ－２を、免疫応答の制御における重要な交点とし、各治療方法および複雑な免疫調節の魅力的な標的としている。さらに、受容体サブユニットにバイアスがかかったＩＬ－２バリアントは、ヘルパー細胞および細胞傷害性エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞を最小限としながら、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の増殖および活性を促進するための、ＩＬ－２を介した選択的な免疫調節の達成を可能とし、炎症誘発性シグナル伝達分子のレベルを低下させた。
【発明の概要】
【０００７】
一つの態様において、本発明は、変異型のＩＬ－２バリアントの作製に関する。これらのバリアントは、通常ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞毒性効果を有するＣＤ８＋Ｔリンパ球、およびＮＫ細胞を超えて、Ｔｒｅｇ（ＴＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）細胞刺激における選択性が増強されていることを特徴とする。具体的には、これらのバリアントは自己免疫性・炎症性障害におけるＩＬ－２療法を向上させるための実際的な解決法を提供する。本発明は、１個～数個のアミノ酸が変異していることを除き、ヒトＩＬ－２と一次配列を共有している、ポリペプチドに関する。これらのバリアントは、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒβおよび／またはγｃとの相互作用に対応する位置においてアミノ酸置換を有しており、その結果、これらのバリアントは、ＩＬ－２Ｒβγ受容体複合体に対する親和性が減少しており、ＩＬ－２Ｒβγ発現細胞を活性化する能力が低減または消失しているが、ＩＬ－２Ｒαに結合する能力と、ＩＬ－２Ｒαβγ受容体複合体に結合しそれを活性化する能力は保持している。本発明はまた、自己免疫性障害および種々の炎症性障害を治療するための、これらの変異型バリアントの治療用途を包含する。
【０００８】
一つの態様において、本発明は、変異型のＩＬ－２バリアントの作製に関する。これらのバリアントは、Ｔｒｅｇ選択的活性、凝集低減、発現増加、製造性向上、および開発適合性向上による、属性の組み合わせを有する。これらのバリアントはまた、タンパク質の生物物理学的特性の向上と、ＩＬ－２分子に関連した免疫原リスクの低減と、をもたらす。これらのバリアントは、ＩＬ－２療法を向上させるためのより優れた解決法と、自己免疫性・炎症性障害における毒性の低減と、をもたらす。本発明は、１個～数個のアミノ酸が変異していることを除き、ヒトＩＬ－２と一次配列を共有している、ポリペプチドに関する。
【０００９】
一つの態様において、本発明は、細菌性毒の成分に類似した提案された「
１９
ＬＤＬ」モチーフを除去することを特徴とした、変異型ＩＬ－２バリアントの作製に関する（ＢａｌｕｎａＲ、Ｒｉｚｏら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ、１９９９年；９６巻：頁３９５７－６２）。この「毒性モチーフ」は、ＩＬ－２の直接的な血管毒性に部分的に関与している。毒素様ドメインの決定的な残基であるＤ２０または隣接する２つの残基を除去するために導入される変異は、毒性モチーフを除去し、内皮細胞の損傷を防ぎ、ＶＬＳを大幅に低減させることが期待される。重要なことに、このモチーフはＩＬ－２Ｒβとの接触面に位置しているため、このモチーフに対するアミノ酸置換はＩＬ－２Ｒβに対してのその親和性を減少させ、得られた分子は、Ｔｒｅｇ細胞活性化においての選択性および内皮損傷の低減を含む、２つの有益な特性を有することが期待されるだろう。本発明は、１個～数個のアミノ酸が変異していることを除き、ヒトＩＬ－２と一次配列を共有している、ポリペプチドに関する。本発明はまた、Ｔｒｅｇ細胞欠損型の自己免疫性障害および種々の炎症性障害を治療するための、これらの変異型バリアントの治療用途を包含する。
【００１０】
本発明は、自己免疫性障害および種々の炎症性障害の治療における、現在のＩＬ－２ベースの免疫調節戦略の、実質的な改善を可能にする。具体的には、本明細書に記載の変異型バリアントによるネイティブＩＬ－２の置換によって、Ｔｒｅｇ細胞のＣＤ２５に偏った選択的刺激が生じる。種々の実施形態において、ＩＬ－２バリアント（または変異体）は、配列番号３に記載の成熟ヒトＩＬ－２ポリペプチドの配列に由来するＩＬ－２バリアント（または変異体）の配列を含む。種々の実施形態において、ＩＬ－２バリアントはＩＬ－２アゴニストとしての機能を有する。種々の実施形態において、ＩＬ－２バリアントはＩＬ－２アンタゴニストとしての機能を有する。種々の実施形態において、ＩＬ－２バリアントは、配列番号４～４３、１０８～１４６、および１９３～１９７に記載の配列を含む。
（【００１１】以降は省略されています）