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公開番号2024093820
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-07-09
出願番号2022210404
出願日2022-12-27
発明の名称抗菌ペプチドおよびその製造方法
出願人住友化学株式会社
代理人弁理士法人深見特許事務所
主分類C12N 15/31 20060101AFI20240702BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】中性域からアルカリ性域における安定性に優れ、かつ熱安定性に優れる、抗菌活性を有するポリペプチドおよびその製造方法を提供すること。
【解決手段】特定のアミノ酸配列を含む、抗菌活性を有するポリペプチドを提供する。
【選択図】図2
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号１～配列番号６のいずれかのアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、
配列番号１～配列番号６のいずれかのアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列、
を含む、抗菌活性を有するポリペプチド。
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
請求項１に記載の抗菌活性を有するポリペプチドをコードする塩基配列を含む核酸。
【請求項３】
配列番号７～配列番号１２のいずれかの塩基配列を含む、請求項２に記載の核酸。
【請求項４】
請求項２に記載の核酸を含むベクター。
【請求項５】
請求項２または請求項３に記載の核酸を含むｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子。
【請求項６】
ＲＮＡである、請求項５に記載のｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子。
【請求項７】
請求項２もしくは請求項３に記載の核酸、または請求項４に記載のベクターを含む形質転換体。
【請求項８】
抗菌活性を有するポリペプチドの製造方法であって、
（Ａ）化学合成法によって請求項１に記載の抗菌活性を有するポリペプチドを合成する工程、
（Ｂ）請求項５に記載のｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子から前記抗菌活性を有するポリペプチドを翻訳する工程、
（Ｃ）請求項７に記載の形質転換体を培養する工程、または
（Ｄ）受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥＢＰ－０３２００およびＮＩＴＥＢＰ－０３２０１からなる群より選ばれる少なくとも１種の乳酸菌を培養する工程、
を含む、抗菌活性を有するポリペプチドの製造方法。
【請求項９】
第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドの組み合わせ、または、第３ポリペプチドおよび第４ポリペプチドの組み合わせを含む、抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせであって、
前記第１ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号３のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、
前記第２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号４のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、
前記第３ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号１３のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、
前記第４ポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号１４のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含む、抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせ。
【請求項１０】
請求項９に記載の抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせそれぞれをコードする塩基配列を含む核酸の組み合わせであって、
前記核酸の組み合わせは、第１核酸および第２核酸の組み合わせ、または、第３核酸および第４核酸の組み合わせを含み、
前記第１核酸は、前記第１ポリペプチドをコードする塩基配列を含み、
前記第２核酸は、前記第２ポリペプチドをコードする塩基配列を含み、
前記第３核酸は、前記第３ポリペプチドをコードする塩基配列を含み、
前記第４核酸は、前記第４ポリペプチドをコードする塩基配列を含む、核酸の組み合わせ。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌ペプチドおよびその製造方法に関する。
続きを表示（約 4,200 文字）【背景技術】
【０００２】
抗菌ペプチドは、細菌（例えば、乳酸菌等）、動物（例えば、昆虫、哺乳類等）、および植物に至るまで、多種な生物が産生することができ、生体防御に重要な役割を果たす。抗菌ペプチドは、抗生物質と比べて即効性が高いこと、および消化酵素等によってアミノ酸に分解され環境中に残留しないことから、耐性菌が生じにくいと考えられている。抗菌ペプチドは、今日深刻な社会問題となっている薬剤耐性菌への対抗手段として期待されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
米国特許第４５８４１９９号明細書
米国特許第３２９５９８９号明細書
国際公開第８９／１２３９９号
国際公開第２００４／０２９０８２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
乳酸菌（ＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓＡＴＣＣ－１１４５４株）が産生する抗菌ペプチドとして、ナイシンＡが知られている。ナイシンＡは、耐熱性芽胞菌を含む多くのグラム陽性菌に対して高い抗菌活性を示し、酸に対して安定で、腸管内の消化酵素でアミノ酸に分解される。そのため、ナイシンＡは、５０か国以上で食品保存料として実用されている。しかしながら、ナイシンＡは中性域からアルカリ性域では不安定であり、中性域での熱安定性も低い。そのため、ナイシンＡの利用は、酸性域にｐＨ調整して市販されることが多い食品の保存料等に限られていた。また、ナイシンＡは細胞内での翻訳後修飾によって生じる異常アミノ酸（例えば、ランチオニン等）を含むこと、およびランチオニン等によるモノスルフィド結合の架橋構造をとることから、化学合成、遺伝子組換え技術による合成およびｉｎｖｉｔｒｏ翻訳による合成が困難であった。さらにナイシンＡは、グラム陰性細菌（例えば、大腸菌)および真菌（例えば、カンジダ菌)には有効でないことが報告されている。米国特許第４５８４１９９号明細書（特許文献１）、米国特許第３２９５９８９号明細書（特許文献２）、国際公開第８９／１２３９９号（特許文献３）、国際公開第２００４／０２９０８２号（特許文献４）には、ナイシンが食品の保存のために用いられることが開示されている。
【０００５】
このような事情のもと、中性域からアルカリ性域における安定性に優れ、かつ熱安定性に優れる抗菌ペプチドが望まれている。本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、中性域からアルカリ性域における安定性に優れ、かつ熱安定性に優れる、抗菌活性を有するポリペプチドおよびその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下に例示する項目に関する。
［１］配列番号１～配列番号６のいずれかのアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、
配列番号１～配列番号６のいずれかのアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列、
を含む、抗菌活性を有するポリペプチド。
［２］［１］に記載の抗菌活性を有するポリペプチドをコードする塩基配列を含む核酸。
［３］配列番号７～配列番号１２のいずれかの塩基配列を含む、［２］に記載の核酸。
［４］［２］または［３］に記載の核酸を含むベクター。
［５］［２］または［３］に記載の核酸を含むｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子。
［６］ＲＮＡである、［５］に記載のｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子。
［７］ [２]もしくは[３]に記載の核酸、または［４］に記載のベクターを含む形質転換体。
［８］抗菌活性を有するポリペプチドの製造方法であって、
（Ａ）化学合成法によって［１］に記載の抗菌活性を有するポリペプチドを合成する工程、
（Ｂ）［５］または［６］に記載のｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子から上記抗菌活性を有するポリペプチドを翻訳する工程、
（Ｃ）［７］に記載の形質転換体を培養する工程、または
（Ｄ）受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３１９８、ＮＩＴＥＢＰ－０３２００およびＮＩＴＥＢＰ－０３２０１からなる群より選ばれる少なくとも１種の乳酸菌を培養する工程、
を含む、抗菌活性を有するポリペプチドの製造方法。
［９］第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドの組み合わせ、または、第３ポリペプチドおよび第４ポリペプチドの組み合わせを含む、抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせであって、
上記第１ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号３のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、
上記第２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号４のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、
上記第３ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号１３のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、
上記第４ポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号１４のアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含む、抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせ。
［１０］［９］に記載の抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせそれぞれをコードする塩基配列を含む核酸の組み合わせであって、
上記核酸の組み合わせは、第１核酸および第２核酸の組み合わせ、または、第３核酸および第４核酸の組み合わせを含み、
上記第１核酸は、上記第１ポリペプチドをコードする塩基配列を含み、
上記第２核酸は、上記第２ポリペプチドをコードする塩基配列を含み、
上記第３核酸は、上記第３ポリペプチドをコードする塩基配列を含み、
上記第４核酸は、上記第４ポリペプチドをコードする塩基配列を含む、核酸の組み合わせ。
［１１］上記第１核酸は、配列番号９の塩基配列を含み、
上記第２核酸は、配列番号１０の塩基配列を含み、
上記第３核酸は、配列番号１５の塩基配列を含み、
上記第４核酸は、配列番号１６の塩基配列を含む、［１０］に記載の核酸の組み合わせ。
［１２］［１０］または［１１］に記載の核酸の組み合わせを含むベクター。
［１３］［１０］または［１１］に記載の核酸の組み合わせを含むｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子。
［１４］ＲＮＡである、［１３］に記載のｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子。
［１５］ [１０]もしくは[１１]に記載の核酸の組み合わせ、または［１２］に記載のベクターを含む形質転換体。
［１６］抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせの製造方法であって、
（Ａ）化学合成法によって［９］に記載のポリペプチドの組み合わせにおけるポリペプチドそれぞれを合成する工程、
（Ｂ）［１３］または［１４］に記載のｉｎ－ｖｉｔｒｏ用翻訳鋳型分子から上記ポリペプチドの組み合わせにおけるポリペプチドそれぞれを翻訳する工程、
（Ｃ）［１５］に記載の形質転換体を培養する工程、または
（Ｄ）受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３２００の乳酸菌を培養する工程、
を含む、抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせの製造方法。
［１７］［１］に記載の抗菌活性を有するポリペプチド、または［９］に記載の抗菌活性を有するポリペプチドの組み合わせと、
添加剤とを含む抗菌用組成物。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、中性域からアルカリ性域における安定性に優れ、かつ熱安定性に優れる、抗菌活性を有するポリペプチドおよびその製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
抗菌活性評価試験を説明する模式図である。
実施例に係るポリペプチドの抗菌活性評価試験の結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を実施するための形態（以下「本実施形態」と記す。）について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではない。本明細書において「Ａ～Ｚ」という形式の表記は、範囲の上限下限（すなわちＡ以上Ｚ以下）を意味し、Ａにおいて単位の記載がなく、Ｚにおいてのみ単位が記載されている場合、Ａの単位とＺの単位とは同じである。本明細書において「～を含む」との表現は、「～からなる」、「～のみからなる」の概念を含む表現である。
【００１０】
［抗菌活性を有するポリペプチド］
本実施形態に係る抗菌活性を有するポリペプチドは、
配列番号１～配列番号６のいずれかのアミノ酸配列に対して、８５％以上１００％以下の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、
配列番号１～配列番号６のいずれかのアミノ酸配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列、
を含む、抗菌活性を有するポリペプチドである。以下、抗菌活性を有するポリペプチドを単に「ポリペプチド」と表記する場合がある。
（【００１１】以降は省略されています）

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