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公開番号2025130117
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-08
出願番号2024027074
出願日2024-02-27
発明の名称スクリーニング方法、スクリーニングキット、オリゴペプチドおよび組成物
出願人森永乳業株式会社
代理人個人
主分類G01N 33/50 20060101AFI20250901BHJP(測定;試験)
要約【課題】本技術は、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、対象タンパク質と特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドをスクリーニングする方法において、当該対象タンパク質がペプチドと非特異的に結合し得るドメインを有するか否かに関わらず、スクリーニングする技術を提供することを主目的とする。
【解決手段】本発明者らは鋭意研究した結果、対象物質と特異的に相互作用する対象タンパク質の、前記対象物質に対する抗体を用いて、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーからリガンド候補ペプチドをスクリーニングすることで、前記対象タンパク質が、前記リガンド候補ペプチド以外のペプチドと非特異的に結合し得るドメインを有していたとしても、好適にリガンド候補ペプチドをスクリーニングできることを見出した。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
対象タンパク質が特異的に相互作用する対象物質とは異なり、かつ、前記対象タンパク質が特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドを、
前記対象物質に対するスクリーニング用抗体を用いて、
既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、スクリーニングするスクリーニング方法。
続きを表示（約 890 文字）【請求項２】
前記対象タンパク質が、ペプチドと非特異的に結合し得るドメインを有するタンパク質である、請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
前記対象タンパク質が、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶである、請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
請求項１に記載のスクリーニング方法を行った後、
前記既存のタンパク質の配列情報に基づき、前記スクリーニング方法によってスクリーニングされた、前記リガンド候補ペプチドの配列を基準とする次段階オーバーラップペプチドライブラリーを作成し、
前記次段階オーバーラップペプチドライブラリーから、
前記スクリーニング用抗体を用いた、次段階リガンド候補ペプチドのスクリーニングを１回以上行う、スクリーニング方法。
【請求項５】
前記リガンド候補ペプチドが、オリゴペプチドである、請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項６】
前記ペプチドライブラリーが、前記既存のタンパク質の配列を基に生成されたオーバーラップペプチドライブラリーである、請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
前記スクリーニング用抗体が、モノクロ―ナル抗体である、請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載のスクリーニング方法によるスクリーニングによって特定されたオリゴペプチド。
【請求項９】
対象タンパク質が特異的に相互作用する対象物質に対するスクリーニング用抗体を備える、
前記対象物質以外のペプチドであって、前記対象タンパク質が特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドを、スクリーニングするためのスクリーニングキット。
【請求項１０】
Ｎ末端から２～４残基のうち、１以上のアミノ酸がシステインである、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶと相互作用するオリゴペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本技術は、スクリーニング方法、スクリーニングキット、オリゴペプチドおよび組成物に関する。より詳しくは、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、対象タンパク質と特異的に相互作用し得るペプチド（リガンド候補ペプチド）を好適にスクリーニングする技術および当該スクリーニングされたペプチド等に関する。
続きを表示（約 2,600 文字）【背景技術】
【０００２】
従来から、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、リガンド候補ペプチドをスクリーニングする技術は知られている。
【０００３】
例えば、下記非特許文献１には、α－ラクトアルブミンの配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、対象タンパク質であるＤＰＰ４を用いて、当該ＤＰＰ４と相互作用し得るペプチドをスクリーニングする方法が開示されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
ＰｅｐｔｉｄｅＡｒｒａｙｏｎＣｅｌｌｕｌｏｓｅＳｕｐｐｏｒｔ-ＡＳｃｒｅｅｎｉｎｇＴｏｏｌｔｏＩｄｅｎｔｉｆｙＰｅｐｔｉｄｅｓＷｉｔｈＤｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＡｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｉｎｔｈｅＳｅｑｕｅｎｃｅｏｆ α－Ｌａｃｔａｌｂｕｍｉｎ／Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１４，１５，２０８４６－２０８５８；ｄｏｉ：１０．３３９０／ｉｊｍｓ１５１１２０８４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本技術は、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、対象タンパク質と特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドをスクリーニングする方法において、当該対象タンパク質がペプチドと非特異的に結合し得るドメインを有するか否かに関わらず、スクリーニングする技術を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは鋭意研究した結果、対象物質と特異的に相互作用する対象タンパク質の、前記対象物質に対する抗体を用いて、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーからリガンド候補ペプチドをスクリーニングすることで、前記対象タンパク質が、前記リガンド候補ペプチド以外のペプチドと非特異的に結合し得るドメインを有していたとしても、好適にリガンド候補ペプチドをスクリーニングできることを見出した。
【０００７】
すなわち、本技術では、対象タンパク質が特異的に相互作用する対象物質とは異なり、かつ、前記対象タンパク質が特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドを、
前記対象物質に対するスクリーニング用抗体を用いて、既存のタンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、スクリーニングするスクリーニング方法を提供する。
本技術のスクリーニング方法において、前記対象タンパク質は、ペプチドと非特異的に結合し得るドメインを有するタンパク質であってもよく、例えば、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶであってもよい。
本技術は、本技術のスクリーニング方法を行った後、前記既存のタンパク質の配列情報に基づき、前記スクリーニング方法によってスクリーニングされた、前記リガンド候補ペプチドの配列を基準とする次段階オーバーラップペプチドライブラリーを作成し、前記次段階オーバーラップペプチドライブラリーから、前記スクリーニング用抗体を用いた、次段階リガンド候補ペプチドのスクリーニングを１回以上行ってもよい。
本技術のスクリーニング方法において、前記リガンド候補ペプチドが、オリゴペプチドであってもよい。
本技術のスクリーニング方法において、前記ペプチドライブラリーが、前記既存のタンパク質の配列を基に生成されたオーバーラップペプチドライブラリーであってもよい。
本技術のスクリーニング方法において、前記スクリーニング用抗体が、モノクロ―ナル抗体であってもよい。
本技術では、対象タンパク質が特異的に相互作用する対象物質に対するスクリーニング用抗体を備える、前記対象物質以外のペプチドであって、前記対象タンパク質が特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドを、スクリーニングするためのスクリーニングキットを提供する。
【０００８】
次に、本技術では、本技術のスクリーニング方法によるスクリーニングによって特定されたオリゴペプチドを提供する。
本技術のオリゴペプチドは、Ｎ末端から２～４残基のうち、１以上のアミノ酸がシステインである、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶと相互作用するオリゴペプチドであってもよく、この場合における前記システインが、還元型システインであってもよい。
本技術のオリゴペプチドは、Ｎ末端が、ＹＰＳＹＧＬＮＹ、ＫＡＬＣＳＥＫＬ、ＬＡＣＱＣＬＶＲ、ＬＡＨＫＡＬＣＳ、ＭＣＶＫＫＩＬＤ、ＥＣＡＱＫＫＩＩ、ＬＱＳＷＭＨＱＰ、ＰＡＫＳＣＱＡＱ、ＡＣＱＣＬＶＲＴ、ＬＬＱＳＷＭＨＱ、ＶＰＡＫＳＣＱＡのいずれかの配列を有するオリゴペプチドであってもよい。
本技術では、さらに、本技術のオリゴペプチドを含む組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
乳タンパク質の配列を基に生成されたペプチドライブラリーから、本技術により、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶと特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドをスクリーニングした結果である。
本技術のスクリーニングで得られたリガンド候補ペプチドの配列を基準とする次段階オーバーラップペプチドライブラリーから、改めて本技術により、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ－ＰｅｐｔｉｄａｓｅＩＶと特異的に相互作用し得るリガンド候補ペプチドをスクリーニングした結果である。
オリゴペプチドの酸化処理の有無によるＤＰＰＩＶに対する阻害活性への影響を測定した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下に本技術の好ましい実施形態について説明する。ただし、以下に示す実施形態は本技術の代表的な実施形態の一例を示したものであり、本技術は以下の好ましい実施形態のみに限定されず、本技術の範囲内で自由に変更することができる。
（【００１１】以降は省略されています）

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