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公開番号2025111202
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-30
出願番号2024005473
出願日2024-01-17
発明の名称ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の製造方法及びアミド化合物の製造方法
出願人三井化学株式会社
代理人弁理士法人太陽国際特許事務所
主分類C12N 9/88 20060101AFI20250723BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の品質を向上しうる菌体処理物の製造方法、及び前記方法で菌体処理物を製造することを含むアミド化合物の製造方法を提供する。
【解決手段】ニトリルヒドラターゼを生産する微生物から得られるニトリルヒドラターゼを含む液体の濃縮を行う工程を含み、前記濃縮は前記液体のpHが8.3以上である状態で行われる、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の製造方法。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ニトリルヒドラターゼを生産する微生物から得られるニトリルヒドラターゼを含む液体の濃縮を行う工程を含み、前記濃縮は前記液体のｐＨが８．３以上である状態で行われる、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の製造方法。
続きを表示（約 410 文字）【請求項２】
前記濃縮は前記液体のｐＨが１０．０以下である状態で行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記濃縮は限外ろ過膜を用いて行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
ニトリルヒドラターゼを含む液体の濃縮を行う工程の前に、ニトリルヒドラターゼを生産する微生物の破砕物とニトリルヒドラターゼとを含む破砕液を得る工程と、前記破砕液に含まれるニトリルヒドラターゼ以外の成分の少なくとも一部を除去する工程と、をさらに含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
前記微生物は大腸菌である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
請求項１～請求項５のいずれか１項に記載の製造方法によってニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物を製造する工程と、前記菌体処理物とニトリル化合物とを混合する工程と、を含む、アミド化合物の製造方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の製造方法及びアミド化合物の製造方法に関する。
続きを表示（約 2,200 文字）【背景技術】
【０００２】
ニトリルヒドラターゼは、種々の化合物のニトリル基を水和によりアミド基に変換するニトリル水和活性を有する酵素である。ニトリルヒドラターゼは、その酵素反応を利用したアミド化合物の工業的な製造プロセスにおいて利用されている。
【０００３】
ニトリルヒドラターゼを生産する方法としては、ニトリルヒドラターゼを生産しうる微生物を培養し、次いで培養液中の微生物を破砕してニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物を得る方法が知られている。
上記方法で得られる菌体処理物は、ニトリルヒドラターゼとともに菌体由来の夾雑物を含みうる。夾雑物は、例えば、菌体処理物又はこれを用いて製造されるアミド化合物の品質低下の原因となりうる。このため、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理に含まれる夾雑物の量を低減する試みがなされている。
【０００４】
菌体処理物に含まれる夾雑物の量を低減する手法として、例えば、特許文献１にはニトリルヒドラターゼを生産する微生物の破砕液をろ過する前に破砕液と特定の凝集剤とを混合する方法が記載されている。特許文献２にはニトリルヒドラターゼを生産する微生物の破砕液に特定のろ過助剤を添加した状態でろ過する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
特開２０１９－１７６８３６号公報
特開２０１９－１７６８３７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ニトリルヒドラターゼの酵素反応を利用するアミド化合物の製造技術において、アミド化合物の製造に使用するニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の品質にはいまだ向上の余地がある。また、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の品質を向上しうる手法を新たに見出すことは、ニトリルヒドラターゼを利用するアミド化合物の製造技術の発展に大きく寄与するものである。
上記状況に鑑み、本開示の一実施形態は、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の品質を向上しうる菌体処理物の製造方法、及び前記方法で菌体処理物を製造することを含むアミド化合物の製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するための手段には、以下の実施態様が含まれる。
＜１＞ニトリルヒドラターゼを生産する微生物から得られるニトリルヒドラターゼを含む液体の濃縮を行う工程を含み、前記濃縮は前記液体のｐＨが８．３以上である状態で行われる、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の製造方法。
＜２＞前記濃縮は前記液体のｐＨが１０．０以下である状態で行われる、＜１＞に記載の製造方法。
＜３＞前記濃縮は限外ろ過膜を用いて行われる、＜１＞又は＜２＞に記載の製造方法。
＜４＞ニトリルヒドラターゼを含む液体の濃縮を行う工程の前に、ニトリルヒドラターゼを生産する微生物の破砕物とニトリルヒドラターゼとを含む破砕液を得る工程と、前記破砕液に含まれるニトリルヒドラターゼ以外の成分の少なくとも一部を除去する工程と、をさらに含む、＜１＞～＜３＞のいずれか１項に記載の製造方法。
＜５＞前記微生物は大腸菌である、＜１＞～＜４＞のいずれか１項に記載の製造方法。
＜６＞＜１＞～＜５＞のいずれか１項に記載の製造方法によってニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物を製造する工程と、前記菌体処理物とニトリル化合物とを混合する工程と、を含む、アミド化合物の製造方法。
【発明の効果】
【０００８】
本開示の一実施形態によれば、ニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の品質を向上しうる菌体処理物の製造方法、及び前記方法で菌体処理物を製造することを含むアミド化合物の製造方法が提供される。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本開示において「工程」との語は、独立した工程だけでなく、他の工程と明確に区別できない場合であっても当該工程の所期の目的が達成されれば、本用語に含まれる。
本開示において「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。
本開示において、組成物中の各成分の量は、組成物中の各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
本開示において「（メタ）アクリルアミド」の表記はアクリルアミド若しくはメタクリルアミド又はその両方を表し、「（メタ）アクリロニトリル」の表記はアクリロニトリル若しくはメタクリロニトリル又はその両方を表し、「（メタ）アクリレート」の表記はアクリレート若しくはメタクリレート又はその両方を表す。
【００１０】
＜菌体処理物の製造方法＞
本開示に係るニトリルヒドラターゼを含む菌体処理物の製造方法は、ニトリルヒドラターゼを生産する微生物から得られるニトリルヒドラターゼを含む液体の濃縮を行う工程を含み、前記濃縮は前記液体のｐＨが８．３以上である状態で行われる。
（【００１１】以降は省略されています）

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