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公開番号2025103248
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-09
出願番号2023220512
出願日2023-12-27
発明の名称抗原ポリペプチドを含有する組成物及びその利用
出願人サンスター株式会社
代理人弁理士法人三枝国際特許事務所
主分類C07K 14/195 20060101AFI20250702BHJP(有機化学)
要約【課題】安定した抗体価測定結果が得られる抗原ポリペプチドを含有する組成物の提供。
【解決手段】無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された、
配列番号1に示すアミノ酸配列又は配列番号1に示すアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを含有する組成物であって、
当該抗原ポリペプチドをSDS-PAGEにより分離した時に、
25kDaのバンドの濃さに対する120kDaのバンドの濃さの比率が、5.25～13.60である、及び/又は
78kDaのバンドの濃さに対する120kDaのバンドの濃さの比率が、14.69～29.41である、組成物。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された、
配列番号１に示すアミノ酸配列又は配列番号１に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを含有する組成物であって、
当該抗原ポリペプチドをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離した時に、
２５ｋＤａのバンドの濃さに対する１２０ｋＤａのバンドの濃さの比率が、５．２５～１３．６０である、及び／又は
７８ｋＤａのバンドの濃さに対する１２０ｋＤａのバンドの濃さの比率が、１４．６９～２９．４１である、組成物。
続きを表示（約 620 文字）【請求項２】
無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された、
配列番号１に示すアミノ酸配列又は配列番号１に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを含有する組成物であって、
当該抗原ポリペプチドをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離した時に、
９６ｋＤａのバンドの濃さに対する１２０ｋＤａのバンドの濃さの比率が、１０．７４～１８．２０である、
２５ｋＤａのバンドの濃さに対する９６ｋＤａのバンドの濃さの比率が、０．３７～０．９３である、及び／又は
７８ｋＤａのバンドの濃さに対する９６ｋＤａのバンドの濃さの比率が、１．２７～１．７７である、組成物。
【請求項３】
無細胞タンパク質合成系が、小麦無細胞タンパク質合成系である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
生細胞タンパク質合成系が、大腸菌タンパク質合成系である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
歯周病原菌抗体価測定用試薬である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の歯周病原菌抗体価測定用試薬を含む歯周病原菌抗体価測定用キット。
【請求項７】
生体試料を請求項１又は２に記載の組成物と接触させることを含む、
生体試料中の歯周病原菌に対する抗体価を測定する方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、抗原ポリペプチドを含有する組成物及びその利用等に関する。
続きを表示（約 2,600 文字）【背景技術】
【０００２】
歯周病は、歯周病原菌が歯周組織に感染することによって発症する炎症性疾患である。一般に、歯周病の診断は、歯周ポケット検査、触診・出血検査、動揺度検査、Ｘ線写真検査等の結果を総合して行われているが、これらの検査手法は歯科医師等の経験・技能等に基づいて行われるため、検査結果及び診断結果に差異が生じる可能性があり、客観性に欠くという問題がある。そのため、客観的に歯周病の診断を行う手法の開発が望まれている。
【０００３】
客観的に歯周病の診断を行う手法としては、例えば、歯周病原菌に対する血清中のＩｇＧ抗体価を歯周病の感染度又は重篤度の指標とする方法が報告されており、本発明者らが開発した手法では、歯周病原菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）から単離された特定の１次構造を有するポリペプチド又はその改変ポリペプチド（歯周病原菌抗原ポリペプチド）を用いることにより、多様な免疫型を有する広範囲の患者の歯周病を高い精度で検査することができ、かつ自動化された機器等により高速処理を行うことが可能となる（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
特許第６３１０６３１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明者は、無細胞又は生細胞タンパク質合成系により、配列番号１又は２に示すアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを合成すると、抗原ポリペプチドそのもの（１２０ｋＤａ）に加えて、当該抗原ポリペプチド由来の短いポリペプチド断片が含まれることを見出した。ロットにより、短いポリペプチド断片を含む混合物中の抗原ポリペプチド（１２０ｋＤａ）の純度には差があり、純度の違う抗原ポリペプチドを用いて、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの抗体価測定を行ったところ、測定結果に差が生じ、驚くべきことに抗原ポリペプチド（１２０ｋＤａ）の純度が低い方が、安定した測定結果が得られることが分かった。本開示は、このような安定した抗体価測定結果が得られる抗原ポリペプチドを含有する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された配列番号１又は２に示すアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドが、特定のバンドサイズのポリペプチドを特定の比率で含有することによって、安定した抗体価測定結果が得られることを見出し、さらに改良を重ねた。
【０００７】
本開示は、例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された、
配列番号１に示すアミノ酸配列又は配列番号１に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを含有する組成物であって、
当該抗原ポリペプチドをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離した時に、
２５ｋＤａのバンドの濃さに対する１２０ｋＤａのバンドの濃さの比率が、５．２５～１３．６０である、及び／又は
７８ｋＤａのバンドの濃さに対する１２０ｋＤａのバンドの濃さの比率が、１４．６９～２９．４１である、組成物。
項２．
無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された、
配列番号１に示すアミノ酸配列又は配列番号１に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを含有する組成物であって、
当該抗原ポリペプチドをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離した時に、
９６ｋＤａのバンドの濃さに対する１２０ｋＤａのバンドの濃さの比率が、１０．７４～１８．２０である、
２５ｋＤａのバンドの濃さに対する９６ｋＤａのバンドの濃さの比率が、０．３７～０．９３である、及び／又は
７８ｋＤａのバンドの濃さに対する９６ｋＤａのバンドの濃さの比率が、１．２７～１．７７である、組成物。
項３．
無細胞タンパク質合成系が、小麦無細胞タンパク質合成系である、項１又は２に記載の組成物。
項４．
生細胞タンパク質合成系が、大腸菌タンパク質合成系である、項１又は２に記載の組成物。
項５．
歯周病原菌抗体価測定用試薬である、項１又は２に記載の組成物。
項６．
項５に記載の歯周病原菌抗体価測定用試薬を含む歯周病原菌抗体価測定用キット。
項７．
生体試料を項１又は２に記載の組成物と接触させることを含む、
生体試料中の歯周病原菌に対する抗体価を測定する方法。
【発明の効果】
【０００８】
安定した抗体価測定結果が得られる抗原ポリペプチドを含有する組成物が提供される。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本開示に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。
本開示に包含される組成物は、無細胞又は生細胞タンパク質合成系により合成された、配列番号１に示すアミノ酸配列又は配列番号１に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなる抗原ポリペプチドを含有する。本明細書において、当該組成物を「本開示の組成物」と表記することがある。
【００１０】
配列番号１に示すアミノ酸配列は、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ；Ｐ．ｇ．）由来のＡｒｇ－ジンジパインＲｇｐＡタンパク質の２３９～１０９８番目のアミノ酸配列のＮ末端にＧＳＴタグを付加したアミノ酸配列である。Ｐ．ｇ．由来のＡｒｇ－ジンジパインＲｇｐＡタンパク質の２３９～１０９８番目のアミノ酸配列は、抗原ポリペプチドである（抗原性を有する）。本明細書において、「抗原性を有する」とは、歯周病原菌に対する抗体と、抗原抗体反応することを意味する。抗体としては、例えば、ＩｇＧ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ抗体等のイムノグロブリン抗体が挙げられ、イムノグロブリン抗体のいずれかと抗原抗体反応すればよい。中でもＩｇＧ抗体が好ましい。
（【００１１】以降は省略されています）

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