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公開番号2024134764
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-10-04
出願番号2023045118
出願日2023-03-22
発明の名称細胞情報取得方法、及びプログラム
出願人キヤノン株式会社
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類G01N 21/64 20060101AFI20240927BHJP(測定;試験)
要約【課題】細胞の活動状態に関わらず、細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法を提供すること。
【解決手段】細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法であって、前記細胞における代謝状態を変化させることで、第一の代謝経路の代謝状態を示す第一の自家蛍光輝度と、前記第一の代謝経路とは異なる第二の代謝経路の代謝状態を示す第二の自家蛍光輝度の少なくともいずれか一方を変化させる代謝状態変化工程と、前記代謝状態変化工程の後における、前記第一の自家蛍光輝度に関する情報、及び前記第二の自家蛍光輝度に関する情報を用いて、細胞に関する情報を取得する情報取得工程と、を含む細胞情報取得方法。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法であって、
前記細胞における代謝状態を変化させることで、
第一の代謝経路の代謝状態を示す第一の自家蛍光輝度と、前記第一の代謝経路とは異なる第二の代謝経路の代謝状態を示す第二の自家蛍光輝度の少なくともいずれか一方を変化させる代謝状態変化工程と、
前記代謝状態変化工程の後における、前記第一の自家蛍光輝度に関する情報、及び前記第二の自家蛍光輝度に関する情報を用いて、細胞に関する情報を取得する情報取得工程と、
を含む細胞情報取得方法。
続きを表示（約 820 文字）【請求項２】
前記細胞に関する情報は、細胞の代謝状態に関する情報、細胞の種類に関する情報、及び細胞の表現型に関する情報の少なくともいずれかである、請求項１に記載の細胞情報取得方法。
【請求項３】
前記第一の代謝経路、及び前記第二の代謝経路は、解糖系、ＴＣＡ回路、電子伝達系のいずれかである請求項１に記載の細胞情報取得方法。
【請求項４】
前記代謝状態変化工程は、前記第一の代謝経路の代謝状態、及び前記第二の代謝経路の代謝状態の少なくともいずれか一方を変化させる工程を含む請求項１に記載の細胞情報取得方法。
【請求項５】
前記代謝状態変化工程は、前記第一の代謝経路の代謝を亢進し、かつ、前記第二の代謝経路の代謝を阻害する工程を含む請求項４に記載の細胞情報取得方法。
【請求項６】
前記代謝状態変化工程は、前記第一の代謝経路の代謝状態、及び前記第二の代謝経路の代謝状態の少なくともいずれか一方を変化させる成分を有する試薬を添加する添加工程を含む請求項４に記載の細胞情報取得方法。
【請求項７】
前記添加工程は、前記第一の代謝経路の代謝を亢進し、かつ、前記第二の代謝経路の代謝を阻害する成分を有する試薬を添加する工程を含む請求項６に記載の細胞情報取得方法。
【請求項８】
前記試薬は、解糖系亢進剤、解糖系阻害剤、ＴＣＡ回路亢進剤、ＴＣＡ回路阻害剤、電子伝達系亢進剤、及び電子伝達系阻害剤で構成される群から選択される少なくとも１つを含む請求項６に記載の細胞情報取得方法。
【請求項９】
前記試薬は、Ｄ－グルコース、及びアンチマイシンＡを含む請求項６に記載の細胞情報取得方法。
【請求項１０】
前記試薬は前記細胞に対して非侵襲である請求項６に記載の細胞情報取得方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法、及びプログラムに関する。
続きを表示（約 1,600 文字）【背景技術】
【０００２】
細胞の自家蛍光強度から細胞に関する情報を取得することが知られている。微生物を含む検査対象溶液に対して栄養源となる糖を添加し、その時の自家蛍光強度を測定し、糖非添加のサンプルと比較することで検査対象微生物が生存しているかつ代謝活性を有することが判別できると報告されている（特許文献１）。
【０００３】
また、固体または半固体培地上に播種された微生物コロニーの走査スキャンを行い、自家蛍光のスペクトル情報に基づいて微生物の検出、モニタリング、キャラクタリゼーションを行うことができると報告されている（特許文献２）。
【０００４】
しかし、特許文献１においては、代謝活性を有さない微生物と比較することで代謝活性を有する微生物を検出できる一方で、代謝活性を有する微生物同士の判別をすることができない。また、測定のために微生物を固定する必要があるため、試験前後やサンプルを継続培養した経過計測することができない。また、特許文献２においては、固体あるいは半固体培地上に限定されているため、試薬添加は培地作成時に行う必要があり、試薬を途中添加あるいは、取り除くことができない。また、培地上をスキャンするため、１サンプルの測定に時間がかかり、コロニー間の測定に同時性が担保されていない。また、いずれの特許文献も、多数サンプルをバルク測定することを目的としているため、細胞個々の自家蛍光の測定を行う方法には適さない。
【０００５】
検査対象細胞に対して、非侵襲的に試薬を添加し個々の細胞の自家蛍光由来の色彩情報を取得し、そこから得られる情報を解析し、解析結果から細胞個々の代謝状態や細胞種の推論を行うことは行われてこなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
特開２０１６－１１１９４０号広報
特開２０１６－０７３２８８号広報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
表現型の異なる細胞の弁別を行う際に、染色による観察では生細胞の情報を取得ができず、非侵襲的な測定としては自家蛍光を用いた分析があるが、細胞集団について、その代謝状態・活性化状態は一定ではない。そのため、検査対象に対して、単にある時刻での自家蛍光を取得・解析することによる細胞種弁別、あるいは代謝状態の判定は容易でないということを、本発明者らは見出した。すなわち、糖代謝が優位である細胞が休んでいる場合と、呼吸代謝が優位である細胞が活動的な場合、自家蛍光ではそれらの区別がつかないケースがあることを本発明者らは見出した。
【０００８】
そこで本発明では、細胞の活動状態に関わらず、細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明に係る細胞情報取得方法は、細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法であって、前記細胞における代謝状態を変化させることで、第一の代謝経路の代謝状態を示す第一の自家蛍光輝度と、前記第一の代謝経路とは異なる第二の代謝経路の代謝状態を示す第二の自家蛍光輝度の少なくともいずれか一方を変化させる代謝状態変化工程と、前記代謝状態変化工程の後における、前記第一の自家蛍光輝度に関する情報、及び前記第二の自家蛍光輝度に関する情報を用いて、細胞に関する情報を取得する情報取得工程と、を含む。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係る細胞情報取得方法によれば、細胞の活動状態に関わらず、細胞から発せられる自家蛍光を用いて細胞に関する情報を取得する細胞情報取得方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
（【００１１】以降は省略されています）

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