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公開番号2025097821
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-01
出願番号2023214254
出願日2023-12-19
発明の名称パン酵母の菌株識別用プライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ、及びパン酵母の菌株識別方法
出願人株式会社カネカ
代理人弁理士法人有古特許事務所
主分類C12N 15/11 20060101AFI20250624BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】パン酵母の菌株が特定のパン酵母の菌株であるか否かを識別し得るプライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ、及びパン酵母の菌株識別方法を提供すること。
【解決手段】プライマーセット1～7よりなる群から選択される少なくとも1種のプライマーセットから構成される、パン酵母の菌株識別用プライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
下記のプライマーセット１～７よりなる群から選択される少なくとも１種のプライマーセットから構成される、パン酵母の菌株識別用プライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ。
プライマーセット１：配列番号１に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット；
プライマーセット２：配列番号３に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号４に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット；
プライマーセット３：配列番号５に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号６に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット；
プライマーセット４：配列番号７に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号８に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット；
プライマーセット５：配列番号９に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号１０に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット；
プライマーセット６：配列番号１１に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号１２に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット；
プライマーセット７：配列番号１３に示される塩基配列からなるプライマー及び配列番号１４に示される塩基配列からなるプライマーにより構成されるプライマーセット
続きを表示（約 770 文字）【請求項２】
前記パン酵母の菌株が、サッカロミセス・セレビシエに属するＣＦＢ２７－１（受託番号：ＦＥＲＭＰ－１５９０３）、ＫＧＬＹ５９（受託番号：ＦＥＲＭＰ－２０６３５）、ＫＣＹ１２１７（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－１０５８）、ＫＣＹ１２２２（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－１０５９）、ＫＣＹ１２５４（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－１３９６）、又はＫＣＹ１２７８（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－０２４６２）である、請求項１に記載のプライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ。
【請求項３】
請求項１に記載のプライマーセットを用いて識別対象のパン酵母のＤＮＡ及び比較対象のパン酵母のＤＮＡをそれぞれＰＣＲ法により増幅する工程、
前記増幅する工程において増幅した前記識別対象のパン酵母のＤＮＡ及び前記比較対象のパン酵母のＤＮＡをそれぞれ検出する工程、並びに
前記検出する工程により検出された前記識別対象のパン酵母のＤＮＡ断片の長さを、前記比較対象のパン酵母のＤＮＡ断片の長さと比較することにより、前記比較対象のパン酵母の菌株に対する前記識別対象のパン酵母の菌株の同一性を判断する工程を有する、パン酵母の菌株識別方法。
【請求項４】
前記比較対象のパン酵母の菌株が、サッカロミセス・セレビシエに属するＣＦＢ２７－１（受託番号：ＦＥＲＭＰ－１５９０３）、ＫＧＬＹ５９（受託番号：ＦＥＲＭＰ－２０６３５）、ＫＣＹ１２１７（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－１０５８）、ＫＣＹ１２２２（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－１０５９）、ＫＣＹ１２５４（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－１３９６）、又はＫＣＹ１２７８（受託番号：ＮＩＴＥＢＰ－０２４６２）である、請求項３に記載のパン酵母の菌株識別方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
パン酵母の菌株識別用プライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ、及びパン酵母の菌株識別方法に関する。
続きを表示（約 1,300 文字）【背景技術】
【０００２】
パン生地を発酵させるために必要なパン酵母は、近年、求められる機能がより多様で高機能になっている。具体的には、冷凍耐性、低糖・高糖生地中での発酵能、発酵中のカビ抑制物質の産出といった機能が求められており、主に交雑育種、変異処理、又は細胞融合などによる開発が活発になっている。また、多様で高機能なパン酵母が増加するにつれ、自社で開発・生産したパン酵母であるか否かを識別する技術がますます求められるようになっている。
【０００３】
微生物学における菌株同定の一般的手法として、これまでは次世代シーケンサーが用いられてきたが、世界中の菌株のＤＮＡ塩基配列を明らかにするためには多大なコストや手間がかかるという問題がある。
【０００４】
また、ＤＮＡ塩基配列の多型を解析する方法として、ＳＳＲマーカーを用いる方法がある。ＳＳＲは、数塩基の単位配列の繰り返しからなる塩基配列であり、その配列は反復回数が菌株系統間で異なる特徴を持つ。この特徴を利用し、ＳＳＲは作物などの品種の同定のためのマーカーとして用いられてきた。なお、ＤＮＡ塩基配列における、ＳＳＲを有する特定の領域をマイクロサテライトという。
【０００５】
通常、ＳＳＲマーカーの検出は、ＳＳＲマーカーを増幅するプライマーセットを用いてＰＣＲを行い、増幅したＤＮＡ断片を電気泳動によって分離し、ＤＮＡ断片を蛍光色素によって検出する方法により行う。そして、識別は、検出されたＤＮＡ断片の長さの違いを基準となる菌株と比較することによって行う。
【０００６】
特許文献１には特定の系統の大豆とそれ以外の大豆品種鑑別のため、特許文献２にはブナシメジの品種識別のためにＳＳＲマーカーを用いることが開示されている。特許文献１及び２に示されるように、通常、品種識別を行うためであっても複数のＳＳＲマーカーを用いることが必要である。また、非特許文献１にはマイクロサテライトをもとにパン酵母の系統樹を作成した報告がある。しかし、パン酵母の菌株識別には系統樹の作成以上の技術・工夫が必要とされ、ＳＳＲマーカーは、酵母の菌株識別には使用されたことがない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
特開２００７－２２８８３９号公報
特開２０１３－２５５４６６号公報
【非特許文献】
【０００８】
日本調理科学会誌 Vol. 54，No. 5，209～214（2021）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本開示は、パン酵母の菌株が特定のパン酵母の菌株であるか否かを識別し得るプライマーセット又はプライマーセットの組み合わせ、及びパン酵母の菌株識別方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、特定のプライマーセットの少なくとも１種を用いて増幅したパン酵母のＤＮＡ断片の長さに基づき、パン酵母の菌株が特定のパン酵母の菌株であるか否かを識別し得ることを見出した。
（【００１１】以降は省略されています）

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