特許ウォッチ

公開番号2025131708
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-09-09
出願番号2025093225,2021551725
出願日2025-06-04,2020-10-09
発明の名称N-アシル化活性を有する改変酵素
出願人味の素株式会社
代理人弁理士法人酒井国際特許事務所
主分類C12N 9/10 20060101AFI20250902BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】優れたN-アシル-アミノ基含有化合物生産系の確立に有用な酵素を提供する。
【解決手段】(A)特定のアミノ酸配列(1)において、1以上のアミノ酸残基の変異を含むアミノ酸配列からなる、改変アミノ酸配列;(B)前記改変アミノ酸配列において、1もしくは数個の追加のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、もしくは付加を含むアミノ酸配列;または(C)前記改変アミノ酸配列において、1以上のアミノ酸残基の追加変異を含み、前記改変アミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列(1)からなる酵素に対して、(i)L-グルタミン酸および/またはL-アスパラギン酸に対するN-アシル化活性、(ii)L-グルタミン酸に対する基質特異性などのうちのいずれか一つの特性が向上したN-アシル化活性を有する改変酵素を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
下記：
（Ａ）配列番号１のアミノ酸配列において、Ｎ１０１、Ｒ１１７、Ｔ１２２、Ｉ１２３、Ｙ１３４、Ｌ１３７、Ｖ１４０、Ｓ１６１、Ｖ１７４、Ｑ２００、Ｖ２３１、Ｖ３１１、Ｃ３３５、Ｔ３３６、Ｍ３３７、Ａ３３９、Ｓ３４０、Ｙ３４４、Ｒ３５０、Ｇ３７９、Ｋ３８８、Ｌ３９０、Ｓ４５５、Ｅ４８３、Ｑ５３３、およびＣ５７６からなる群から選ばれる１以上のアミノ酸残基の変異を含むアミノ酸配列からなる、改変アミノ酸配列；
（Ｂ）前記改変アミノ酸配列において、１もしくは数個の追加のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、もしくは付加を含むアミノ酸配列；または
（Ｃ）前記改変アミノ酸配列において、１以上のアミノ酸残基の追加変異を含み、前記改変アミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
配列番号１のアミノ酸配列からなる酵素に対して、下記（ｉ）～（ｉｉｉ）のいずれか一つの特性が向上したＮ－アシル化活性を有する改変酵素：
（ｉ）Ｌ－グルタミン酸および／またはＬ－アスパラギン酸に対するＮ－アシル化活性；
（ｉｉ）Ｌ－グルタミン酸に対する基質特異性；あるいは
（ｉｉｉ）Ｌ－グルタミン酸および／またはＬ－アスパラギン酸に対するＮ－アシル化活性、ならびにＬ－グルタミン酸に対する基質特異性。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ－アシル化活性を有する改変酵素などに関する。
続きを表示（約 1,600 文字）【背景技術】
【０００２】
Ｎ－アシル－アミノ基含有化合物（例、Ｎα－アシルアミノ酸）は、香粧品素材（例、界面活性剤）等として用いられている。Ｎ－アシル－アミノ基含有化合物の化学的合成（例、ショッテン・バウマン反応）は、合成反応の副産物による環境負荷の課題を有する。そこで、Ｎ－アシル－アミノ基含有化合物の酵素的合成が求められている。Ｎ－アシル－アミノ基含有化合物の酵素的合成に関する先行技術がいくつか報告されている。
【０００３】
特許文献１では、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓのサーファクチン生合成酵素を利用した糖からのＮα－アシルアミノ酸発酵が報告されている。しかし、Ｎα－アシルグルタミン酸の生成量は１１６．８ｍｇ／Ｌと微量であるため、この発酵は工業的スケールでの製造には適していない。
【０００４】
特許文献２では、ヒト由来アミノ酸Ｎ－アシルトランスフェラーゼ、Ｅ．ｃｏｌｉ由来アシルＣｏＡ合成酵素を利用して、アミノ酸と脂肪酸からＮα－アシルグリシンを合成する方法について報告されている。しかし、この方法では脂肪酸に直接アミノ酸を結合させることができず、２段階の酵素反応が必要となるため、単一の酵素を利用する反応と比較すると制御が複雑になるという課題がある。
【０００５】
非特許文献１では、ブタ腎臓由来アシラーゼを用いて、グリセロールを含む溶液中で、アミノ酸と脂肪酸からＮα－アシルアミノ酸を合成する方法が報告されている。本方法は、グリセロールを含む溶液中では、アシラーゼによるＮα－アシルアミノ酸の加水分解反応が進行しにくいことを利用している。しかし、グリセロールの大量使用が要求される点、およびグリセロールを含まない水系溶媒中でのＮα－アシルアミノ酸合成は低収率となる点に鑑みて、この方法は、工業的製造では低効率となる。
【０００６】
非特許文献２では、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ由来アシラーゼを用いて、グリセロールを含む溶液中で、アミノ酸と脂肪酸からＮα－アシルアミノ酸を合成する方法が報告されている。しかし、グリセロールを含まない水系溶媒中でのＮα－アシルアミノ酸合成は報告されていないため、この方法の工業的製造への効率性は示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
国際公開第２００８／１３１００２号
国際公開第２０１５／０２８４２３号
【非特許文献】
【０００８】
Ｗａｄａｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＯｉｌＣｈｅｍｉｓｔｓ’ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００２，７９（１），ｐｐ４１－４６
Ｋｏｒｅｉｓｈｉｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，５４（１），ｐｐ７２－７８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、優れたＮ－アシル－アミノ基含有化合物生産系の確立に有用な酵素、およびＮ－アシル－アミノ基含有化合物の製造方法などを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意検討した結果、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）由来ｉｎｄｏｌｅ－３－ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ－ａｍｉｄｏｓｙｎｔｈｅｔａｓｅＧＨ３．６（ＡｔＧＨ３－６）のアミノ酸残基を変異させることにより、Ｎ－アシル－アミノ基含有化合物生産能に優れた改変酵素を作製すること、およびＮ－アシル－アミノ基含有化合物生産に有用であるその他の発明を作出することに成功し、本願発明を完成するに至った。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許