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公開番号2025107024
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-07-17
出願番号2024000721
出願日2024-01-05
発明の名称末梢血由来の血球細胞を初期化するための初期化用薬剤およびキット、並びに初期化方法
出願人株式会社東芝,公益財団法人京都大学iPS細胞研究財団
代理人弁理士法人スズエ国際特許事務所
主分類C12N 5/02 20060101AFI20250710BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】均質に人工多能性幹細胞を製造する技術を提供する。
【解決手段】実施形態に従う初期化用薬剤は、末梢血由来の血球細胞を初期化するためのものである。初期化用薬剤は、末梢血由来の単核細胞を含む血球細胞群を初期化してiPS細胞を作製するための初期化因子群と、この初期化因子群を内包する脂質ナノ粒子群とを備える。前記脂質ナノ粒子は、成分の少なくとも40%以上がFFT-10及びFFT-20である。FFT-10及びFFT-20は等量で含まれる。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
末梢血由来の単核細胞を含む血球細胞群を初期化してiPS細胞を作製するための初期化因子群と、前記初期化因子群を内包する脂質ナノ粒子群とを含み、前記脂質ナノ粒子の脂質成分の少なくとも40%以上がFFT-10及びFFT-20であり、且つFFT-10及びFFT-20が等量で含まれる、血球細胞群の初期化用薬剤。
続きを表示（約 730 文字）【請求項２】
前記脂質ナノ粒子は、その成分の60%以下が中性脂質、カチオン性脂質、コレステロール及びPEG修飾脂質である請求項1に記載の薬剤。
【請求項３】
前記脂質ナノ粒子は、中性脂質よりカチオン性脂質を多く含む、請求項１に記載の薬剤。
【請求項４】
前記脂質ナノ粒子は、前記PEG修飾脂質がマレイミド修飾官能基をもつPEG修飾脂質である、請求項２に記載の薬剤。
【請求項５】
前記脂質ナノ粒子は、その脂質組成比が、mol%として、FFT-10:FFT-20:カチオン性脂質:コレステロール:PEG修飾脂質＝17~23:17~23:7~13:45~51:1.5~2.5であり、各成分は合計が100 mol%となるように値が選択される、請求項１に記載の薬剤。
【請求項６】
前記脂質ナノ粒子に内包される前記初期化因子群が、Oct3/4、Sox2、Klf4、cMycを含む、請求項１の薬剤。
【請求項７】
前記脂質ナノ粒子に内包される前記初期化因子群が、更にNanog、Lin28を含む、請求項６に記載の薬剤。
【請求項８】
前記脂質ナノ粒子に内包される前記初期化因子群が、DNA、RNA及び/又はタンパク質の形態にある、請求項１に記載の薬剤。
【請求項９】
前記脂質ナノ粒子が、更に前記初期化因子群以外の更なる因子を含む、請求項１に記載の薬剤。
【請求項１０】
前記脂質ナノ粒子が、前記初期化因子群以外の内包物として、更にインターフェロンの応答を抑制する因子を含む、請求項１に記載の薬剤。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明の実施形態は、末梢血由来の血球細胞を初期化するための初期化用薬剤およびキット、並びに初期化方法に関する。
続きを表示（約 2,500 文字）【背景技術】
【０００２】
人工多能性幹細胞は、一般的にiPS細胞と呼ばれ、ウイルスベクターを用いて細胞に初期化因子を発現させて製造される。ウイルスベクターを用いる場合、感染した細胞内にベクターが留まり、初期化因子を発現し続けるリスクが存在する。また、最終プロダクトにウイルスが残存することも更なるリスクとなり得る。他方、リポフェクションを利用する方法もあるが、この方法を用いた場合、安定または均質にiPS細胞を製造することが容易ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明が解決しようとする課題は、均質に人工多能性幹細胞を製造する技術を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
実施形態に従う初期化用薬剤は、末梢血由来の血球細胞を初期化するためのものである。初期化用薬剤は、末梢血由来の単核細胞を含む血球細胞群を初期化してiPS細胞を作製するための初期化因子群と、この初期化因子群を内包する脂質ナノ粒子群とを備える。前記脂質ナノ粒子は、成分の少なくとも40%以上がFFT-10及びFFT-20である。FFT-10及びFFT-20は等量で含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
第１の実施形態に従う初期化用薬剤の１例を示す断面図。
第１の実施形態に従う初期化用薬剤の更なる１例を示す断面図。
第１の実施形態に従う初期化用薬剤の更なる１例を示す断面図。
第３の実施形態に従う方法を示すスキーム図。
実験結果を示す図。
実験結果を示すイメージ図。
実験結果を示すイメージ図。
実験結果を示すイメージ図。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
以下、実施形態について、添付の図面を参照して説明する。なお、各実施形態において、実質的に同一の構成部位には同一の符号を付し、その説明を一部省略する場合がある。図面は模式的なものであり、各部の厚さと平面寸法との関係、各部の厚さの比率等は現実のものとは異なる場合がある。
【０００７】
（第１の実施形態）
実施形態に従う初期化用薬剤は、末梢血由来の血球細胞を初期化するためのものである。初期化用薬剤は、末梢血由来の単核細胞を含む血球細胞群を初期化してiPS細胞を作製するための初期化因子群と、この初期化因子群を内包する脂質ナノ粒子群とを備える。前記脂質ナノ粒子は、成分の少なくとも40%以上がFFT-10及びFFT-20である。FFT-10及びFFT-20は等量で含まれる。その構造の１例を図１に示す。初期化用薬剤は、例えば、核酸導入キャリアを含み得る。核酸導入キャリア１０１は、中空の脂質ナノ粒子１１と、それに内包された初期化因子群１２とを備える。初期化因子群１２は、末梢血由来の単核細胞を含む血球細胞群を初期化してiPS細胞を作製するための初期化因子群である。
【０００８】
初期化因子群１２は、核酸導入キャリア１０１が末梢血由来の単核細胞を含む血球細胞群に添加されたときに、単核細胞を初期化してiPS細胞を作製する因子である。例えば、初期化因子群１２は、核内のＤＮＡ情報を初期化・リプログラミングできる因子であればよい。例えば、初期化因子は、ｍＲＮＡであり、その場合、初期化因子の細胞質に導入され、細胞質に留まり、初期化物質としてタンパク質である転写因子に翻訳され、核内のＤＡＮをリプログラミングする。初期化因子の種類は、１種類であっても２種類以上であってもよい。必要な初期化因子について、細胞の状態及び投与時期に応じて、核酸導入キャリア１０１により投入されればよい。初期化因子の例は、これらに限定するものではないが、例えば、Oct3/4、Sox2、Klf4、cMyc、Nanog、Lin28のメッセンジャーRNAなどである。例えば、前記初期化因子群は、Oct3/4、Sox2、Klf4、cMycを含んでいてよい。また、前記初期化因子群は、Nanog、Lin28を含んでいてもよく、これらをOct3/4、Sox2、Klf4、cMycに加えて更に含んでいてもよい。脂質ナノ粒子に内包される初期化因子群は、例えば、DNA、RNA及び/又はタンパク質の形態において含まれ得る。
【０００９】
例えば、脂質ナノ粒子は、図２に示すように、導入されるべき初期因子群を２分割して包含してもよい。その場合、脂質ナノ粒子１１に、第１の初期化因子群１２ａを内包する第１の核酸導入キャリア１０１ａと、第２の第２の初期化因子群１２ｂを内包する第２の核酸導入キャリア１０１ｂとを備える核酸導入キャリアセット１００１として提供されてもよい。或いは、図３に示されるように、核酸導入キャリアセット２００１として、導入されるべき初期化因子群に含まれるｎ種類の初期化因子のそれぞれを第１の核酸導入キャリア１０１ａ～第ｎの核酸導入キャリア１０１ｎに内包されてもよい。ここで、ｎは２以上の整数である。或いは所望の種類の初期化因子毎に所望の数の核酸導入キャリアに分割して含ませてもよい。
【００１０】
脂質ナノ粒子は、リポソームであり得る。それは、水溶液のコアを内包する脂質膜の粒子、例えば、脂質二重層膜の粒子であり得る。リポソームを形成する脂質組成は、その構成成分として式（Ｉ）の第１脂質（FFT-10）及び／又は式（ＩＩ）の第２脂質（FFT-20）を含む。これらの脂質は生分解性脂質である。脂質ナノ粒子は、その成分の少なくとも40%以上がFFT-10及びFFT-20であり、且つFFT-10及びFFT-20は等量で含まれている。このような組成の脂質組成の脂質粒子を用いることにより、末梢血由来の血球細胞の初期化が可能となる。
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70
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（【００１１】以降は省略されています）

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