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公開番号2025148114
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-07
出願番号2024048719
出願日2024-03-25
発明の名称抗ヒトノロウイルス抗体
出願人花王株式会社
代理人弁理士法人アルガ特許事務所
主分類C07K 16/10 20060101AFI20250930BHJP(有機化学)
要約【課題】GI型及びGII型のノロウイルス粒子に対して特異的な結合活性を示す抗ノロウイルス抗体を提供する。
【解決手段】以下の(a)又は(b)で示されるCDRを含む構造ドメインを1つ以上有する、GI型及びGII型のノロウイルスに結合する抗体。
(a)GRTFSMYTMG(配列番号1)で示されるアミノ酸配列からなるCDR1、AISWRTY(配列番号2)で示されるアミノ酸配列からなるCDR2、及びDGGY(配列番号3)で示されるアミノ酸配列からなるCDR3
(b)GFTFSHAYMS(配列番号7)で示されるアミノ酸配列からなるCDR1、AINYSGDSTF(配列番号8)で示されるアミノ酸配列からなるCDR2、及びFWWTYDY(配列番号9)で示されるアミノ酸配列からなるCDR3
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
以下の（ａ）又は（ｂ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有する、ＧＩ型及びＧＩＩ型のノロウイルスに結合する抗体。
（ａ）ＧＲＴＦＳＭＹＴＭＧ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＳＷＲＴＹ（配列番号２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＤＧＧＹ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｂ）ＧＦＴＦＳＨＡＹＭＳ（配列番号７）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＮＹＳＧＤＳＴＦ（配列番号８）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＦＷＷＴＹＤＹ（配列番号９）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
続きを表示（約 1,700 文字）【請求項２】
ノロウイルス構造タンパク質に結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項３】
単一ドメイン抗体又はその多量体である、請求項１又は２記載の抗体。
【請求項４】
単一ドメイン抗体がＶＨＨ抗体である、請求項３記載の抗体。
【請求項５】
単一ドメイン抗体の多量体が、前記構造ドメインを複数連結した多量体である請求項３記載の抗体。
【請求項６】
単一ドメイン抗体の多量体が、前記構造ドメインの１又は複数と、該構造ドメインとは抗原特異性の異なる構造ドメインの１又は複数を連結した多量体である請求項３記載の抗体。
【請求項７】
請求項１～６のいずれか１項記載の抗体をコードする核酸。
【請求項８】
以下の（ａ）及び（ｂ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有するノロウイルスに結合する抗体から選ばれる１種以上と、以下の（ｃ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有するノロウイルスに結合する抗体を含む、ＧＩ型及びＧＩＩ型のノロウイルスに結合する抗体混合物。
（ａ）ＧＲＴＦＳＭＹＴＭＧ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＳＷＲＴＹ（配列番号２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＤＧＧＹ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｂ）ＧＦＴＦＳＨＡＹＭＳ（配列番号７）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＮＹＳＧＤＳＴＦ（配列番号８）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＦＷＷＴＹＤＹ（配列番号９）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｃ）ＧＦＳＶＮＳＬＴＭＳ（配列番号４）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＧＭＮＫＤＧＳＴＳ（配列番号５）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＱＧＰＬＦＲＰＤＬＰＬＹＤＳ（配列番号６）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
【請求項９】
以下の（ａ）又は（ｂ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有する、ＧＩ型及びＧＩＩ型のノロウイルスに結合する抗体を被験試料に接触させる工程を含む、試料中のヒトノロウイルスの検出方法。
（ａ）ＧＲＴＦＳＭＹＴＭＧ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＳＷＲＴＹ（配列番号２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＤＧＧＹ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｂ）ＧＦＴＦＳＨＡＹＭＳ（配列番号７）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＮＹＳＧＤＳＴＦ（配列番号８）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＦＷＷＴＹＤＹ（配列番号９）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
【請求項１０】
以下の（ａ）及び（ｂ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有するノロウイルスに結合する抗体から選ばれる１種以上と、以下の（ｃ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有するノロウイルスに結合する抗体を含むＧＩ型及びＧＩＩ型のノロウイルスに結合する抗体混合物を被験試料に接触させる工程を含む、試料中のヒトノロウイルスの検出方法。
（ａ）ＧＲＴＦＳＭＹＴＭＧ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＳＷＲＴＹ（配列番号２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＤＧＧＹ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｂ）ＧＦＴＦＳＨＡＹＭＳ（配列番号７）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＮＹＳＧＤＳＴＦ（配列番号８）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＦＷＷＴＹＤＹ（配列番号９）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｃ）ＧＦＳＶＮＳＬＴＭＳ（配列番号４）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＧＭＮＫＤＧＳＴＳ（配列番号５）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＱＧＰＬＦＲＰＤＬＰＬＹＤＳ（配列番号６）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明はＧＩ型及びＧＩＩ型のノロウイルス粒子に対して特異的な結合活性を示す抗ヒトノロウイルス抗体に関する。
続きを表示（約 2,600 文字）【背景技術】
【０００２】
ノロウイルスはカリシウイルス科に属する，エンベロープを持たない直径約３０～４０ｎｍの球形ウイルスである。ノロウイルスはヒトに対して嘔吐、下痢などの急性胃腸炎症状を起こす。ヒトノロウイルスは学校や、医療施設、食品取扱施設などの集団施設に持ち込まれると集団発生を引き起こし、食品を汚染すると食中毒の原因となる。ノロウイルスのゲノムは約７．６ｋｂの１本鎖（＋）ＲＮＡであり、近年ではゲノム相同性に基づき遺伝子群1（ＧＩ）、遺伝子群２（ＧＩＩ）、遺伝子群３（ＧＩＩＩ）、遺伝子群４（ＧＩＶ）、遺伝子群５（ＧＶ）、遺伝子群６（ＧＶＩ）及び遺伝子群７（ＧＶＩＩ）の７つの遺伝子群に分類されている。このうち、ＧＩがヒト、ＧＩＩがヒト、ブタ、ＧＩＩＩがウシ、ＧＩＶがヒト、ネコ、イヌ、ＧＶがマウス、ＧＶＩ及びＧＶＩＩがイヌへの感染性を示す（非特許文献１参照）。
【０００３】
ノロウイルスの各遺伝子群には複数の遺伝子型が存在し、ヒトへの感染性を示すノロウイルス（以下、ヒトノロウイルスと呼ぶ）では、ＧＩノロウイルスとしてＧＩ．１～ＧＩ．９の遺伝子型、ＧＩＩノロウイルスとして少なくともＧＩＩ．１～ＧＩＩ．１０、ＧＩＩ．１２～ＧＩＩ．１７、ＧＩＩ．２０～ＧＩＩ．２２の遺伝子型が報告されている。
ノロウイルスのゲノムは変異速度が非常に速く、さらに異なる遺伝子型のウイルス間で組換えを起こすことが報告されており、新たな遺伝子型を示すノロウイルスの出現も確認されている。
【０００４】
ウイルス由来のタンパク質の検出する方法では抗体が用いられ、例えばイムノクロマト法やＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏ－ｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）法を測定原理とした抗原検査法がこれに該当する。ノロウイルスの場合、各遺伝子型はそれぞれ異なる抗原性を示すが、同一遺伝子型は同じ抗原性を示すとされる。また、ノロウイルスの構造タンパク質であるＶＰ１タンパク質には、遺伝子群毎にアミノ酸配列が保存されている領域がする。そのためノロウイルスに対しても、イムノクロマト法やＥＬＩＳＡ法を測定原理とした抗原検査キットが市販されている。
【０００５】
一方、市販されている抗原検査キットの殆どはマウスやウサギ等に由来するモノクローナル、又はポリクローナルＩｇＧ抗体が用いられている。ＶＨＨ（Ｖａｒｉａｂｌｅｄｏｍａｉｎｏｆｈｅａｖｙｃｈａｉｎｏｆｈｅａｖｙｃｈａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ）はラクダ科動物が有する重鎖抗体の可変部ドメインからのみなる単一ドメイン抗体の１つである。ＶＨＨはＩｇＧ抗体と同等の結合活性を示しながらも、（１）ＩｇＧ抗体と比較して分子量が１０分の１程度であり、従来の抗体では結合できない新規のエピトープが期待されること、（２）ＩｇＧ抗体とは異なり、可逆性の高いタンパク質構造をもち、熱や圧に対して優れた耐性を示すこと、（３）ＩｇＧ抗体とは異なり、酵母や細菌等の微生物を用いた生産が可能であること、等の特徴をもつ。さらに、（４）ＶＨＨは、ｃＤＮＡディスプレイ法やファージディスプレイ法等の試験管内の抗体選抜技術との親和性が非常に高く、マウスやウサギ等への免疫によって得られるＩｇＧ抗体と比較して、より短期間に開発することが可能である。そのため、ＶＨＨは医薬品や検査薬に用いられてきたＩｇＧ抗体やＩｇＡ抗体といった従来の免疫グロブリンに代わる抗体としてその利用が期待されている。
【０００６】
抗原検査キットの開発においても、ＶＨＨの優位性は明らかである。特に、ＶＨＨが有する特性から、（１）ＶＨＨは粒子やニトロセルロース膜に高密度に固相化することが可能であり、より多くのパラトープを基材上に提示することができること、（２）ＶＨＨはタンパク質としての安定性に優れており、製品のより優れた保存安定性が期待できること、（３）ＶＨＨは微生物によって大量かつ安価に生産可能であるため、製造原価をより低減させることが出来ること、（４）ＶＨＨはイムノクロマト法において非特異的反応の原因となりうるＦｃ領域を有さないこと、がＩｇＧ抗体と比較して優位であると考えられる。
【０００７】
このように、ＶＨＨは通常の抗体（ＩｇＧ抗体など）と比較して性状面、生産面において多くの利点を有している。そのため、ノロウイルスを標的とする単一ドメイン抗体を用いた検出技術は、従来のＩｇＧ抗体を用いた技術よりも性能面、価格面において有利に提供できる。
【０００８】
抗原検査キットにおいてはより幅広くのヒトノロウイルス遺伝子群、ヒトノロウイルス遺伝子型に反応するモノクローナル抗体の取得が重要となる。単一ドメイン抗体としてはＮａｎｏ－８５がＧＩＩ．１型ノロウイルス、ＧＩＩ．２型ノロウイルス、ＧＩＩ．４型ノロウイルス、ＧＩＩ．１２型ノロウイルス、ＧＩＩ．１７型ノロウイルスに対して反応することが報告されている（非特許文献２）。
【０００９】
しかしながら、ヒトノロウイルスとしてはＧＩノロウイルスとして９種、ＧＩＩノロウイルスとして少なくとも１９種の遺伝子型が報告されていることからも、ヒトノロウイルスにおいてより多くの遺伝子型に反応するＶＨＨの開発が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
Advances in laboratory methods for detection and typing of norovirus. J Clin Microbiol. 2015;53(2):373-81.
Nanobodies targeting norovirus capsid reveal functional epitopes and potential mechanisms of neutralization. PLoS Pathog. 2017;13(11):e1006636.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
（【００１１】以降は省略されています）

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