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公開番号2025174969
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-11-28
出願番号2025132564,2021574169
出願日2025-08-07,2020-06-19
発明の名称治療送達用のプラットフォーム、組成物、および方法
出願人テロスセラピューティクス,インク.
代理人弁理士法人清原国際特許事務所
主分類C12N 5/0775 20100101AFI20251120BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【解決手段】本明細書には、細胞外小胞を生成するためのプラットフォームが記載される。また、細胞外小胞の組成物も記載される。さらに、細胞外小胞を治療用送達に使用する方法も本明細書に記載される。
【選択図】図3
特許請求の範囲【請求項１】
細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはそれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、
ｂ．ＣＤ６３を含む膜貫通部分であって、該ＣＤ６３は３つの膜貫通ドメインを含む、膜貫通部分と
を含み、
前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される、組成物。
続きを表示（約 970 文字）【請求項２】
前記免疫チェックポイント部分が、修飾されたＣＤ６３を生成するために前記ＣＤ６３の細胞外ループに結合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記細胞外ループが、前記修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループまたは第２の細胞外ループである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記修飾されたＣＤ６３が、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記修飾されたＣＤ６３が、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記修飾されたＣＤ６３が、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つを含む、請求項１から５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項７】
細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．ＰＤ－Ｌ１を含む免疫チェックポイント部分と、
ｂ．ラクトアドヘリンを含む膜貫通部分と
を含み、
前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される、組成物。
【請求項８】
細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはそれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、
ｂ．グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）を含む膜貫通部分と
を含み、
前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される、組成物。
【請求項９】
細胞外小胞を含む組成物であって、該細胞外小胞が、
ａ．免疫チェックポイント部分、および
ｂ．膜貫通部分
のうち、少なくとも１つを含む、組成物。
【請求項１０】
前記免疫チェックポイント部分が、細胞外小胞に封入される、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１９年６月２１日出願の米国仮特許出願第６２／８６４，５６６号、および２０１９年７月１７日出願の米国仮特許出願第６２／８７５，００１号に基づく利益を主張するものであり、これら全体は本明細書中で参照により引用される。
続きを表示（約 8,500 文字）【０００２】
参照による引用
本明細書で言及される刊行物、特許、および特許出願はすべて、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により引用されるように具体的かつ個々に指示されるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に引用される。本出願は、「ＲｉａｚｉｆａｒＭ，ＭｏｈａｍｍａｄｉＭＲ，ＰｏｎｅＥＪ，ｅｔａｌ．ＳｔｅｍＣｅｌｌ－ＤｅｒｉｖｅｄＥｘｏｓｏｍｅｓａｓＮａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｆｏｒＡｕｔｏｉｍｍｕｎｅａｎｄＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＤｉｓｏｒｄｅｒｓ．ＡＣＳＮａｎｏ．２０１９；１３（６）：６６７０－６６８８．ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓｎａｎｏ．９ｂ０１００４」を引用しており、その全体は本明細書中で参照により引用される。
【背景技術】
【０００３】
治療薬を標的細胞に送達するのに有効な手段は、近代医療の基礎の１つである。細胞外小胞は、治療薬を標的細胞に送達するためのキャリアとして調査され、利用されている。
【発明の概要】
【０００４】
現行の細胞外小胞を介して治療薬を送達する方法には、欠点がある。細胞外小胞は、サイズ、数、膜特性、または安定性の観点で不均一の場合がある。細胞外小胞により送達可能な治療薬の量は、不均一または予測不能な場合があり、処置が無効になるという結果が生じてしまう。いくつかの例では、細胞外小胞の収率は不適当な場合がある。加えて、細胞外小胞をｉｎｖｉｖｏ標的細胞に向けることは依然として困難であり、循環中の細胞外小胞の大部分が、肝臓、脾臓、および腎臓に蓄積するからである。このため、十分な量の治療薬を標的細胞に送達するための細胞外小胞を含む組成物および医薬組成物が、必要とされ続けている。また、十分な量の治療薬を標的細胞に送達するための細胞外小胞を産生するプラットフォームおよび方法も必要とされ続けている。さらに、治療薬を送達するために細胞外小胞を使用する方法、および疾患または疾病を処置するために細胞外小胞を使用する方法も必要とされ続けている。
【０００５】
本開示の態様は、細胞外小胞を含む組成物を含んでおり、該細胞外小胞は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、ＣＤ６３を含む膜貫通部分であって、該ＣＤ６３は３つの膜貫通ドメインを含む、膜貫通部分とを含み、前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される。いくつかの実施形態では、前記免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３を生成するために前記ＣＤ６３の細胞外ループに結合される。いくつかの実施形態では、前記細胞外ループは、前記修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループまたは第２の細胞外ループである。いくつかの実施形態では、前記修飾されたＣＤ６３は、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記修飾されたＣＤ６３は、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つに少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、前記修飾されたＣＤ６３は、配列番号６～１７に明記されるアミノ酸配列のうちいずれか１つを含む。細胞外小胞を含む組成物であって、前記細胞外小胞は、ＰＤ－Ｌ１を含む免疫チェックポイント部分と、ラクトアドヘリンを含む膜貫通部分とを含み、前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される。細胞外小胞を含む組成物であって、前記細胞外小胞は、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの任意の組合せを含む免疫チェックポイント部分と、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）を含む膜貫通部分とを含み、前記免疫チェックポイント部分は、前記膜貫通部分に結合される。細胞外小胞を含む組成物であって、前記細胞外小胞は、免疫チェックポイント部分、および膜貫通部分のうち、少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞に封入される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞の表面に発現される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、細胞外小胞により分泌される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、膜貫通部分と共有結合される。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０、ＴＮＦＲＳＦ１４）、ガレクチン９、ガレクチン３、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＯＸ－２（ＣＤ２００）、ＰＶＲ（ＣＤ１５５）、ＰＶＲＬ２（ネクチン－２、ＣＤ１１２）、ＦＧＬ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ＴＳＧ－６、ＣＤ４７、スタビリン－１（Ｃｌｅｖｅｒ－１）、ニューロピリン１、ニューロピリン２、ＣＤ１５８（ファミリー）、ＩＧＳＦ２（ＣＤ１０１）、ＣＤ１５５、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、ＰＤ－１、ＲＧＭＢ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ－３、ＣＤ２００Ｒ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ（ＰＶＲＩＧ）、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３）、ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ４４、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、ＰＤ－Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、１４－３－３タンパク質ゼータ／デルタ、４－３－３タンパク質イプシロン、７８ｋＤａグルコース調節タンパク質、アセチルコリンエステラーゼ／ＡＣｈＥ－Ｓ、ＡＣｈＥ－Ｅ、アクチン、細胞質１（ＡＣＴＡ）、ＡＤＡＭ１０、アルカリンホスファターゼ、α－エノラーゼ、α－シヌクレイン、アミノペプチダーゼＮ、アミロイドβ Ａ４／ＡＰＰ、アネキシン５Ａ、アネキシンＡ２、ＡＰ－１、ＡＴＦ３、ＡＴＰシトレートリアーゼ、ＡＴＰアーゼ、βアクチン（ＡＣＴＢ）、β－アミロイド４２、カベオリン１、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１４２、ＣＤ１４６、ＣＤ１６３、ＣＤ２４、ＣＤ２６／ＤＰＰ４、ＣＤ２９／ＩＴＧＢ１、ＣＤ３、ＣＤ３７、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ４９、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７３ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ９、ＣＤ９０、クローディン、クローディン１、コフィリン－１、補体結合タンパク質ＣＤ５５およびＣＤ５９、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０α、細胞質ゾル熱ショックタンパク質９０β、ＥＢＶＬＭＰ１、ＥＢＶＬＭＰ２Ａ、ＥＦ－１α－１、ＥＦ２、ＥＦＧＲＥＧＦＲＶＩＩＩ、エムプリン（ｅｍｍｐｒｉｎ）／ＣＤ１４７、エノラーゼ１α（ＥＮＯ１）、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ２、テトラスパニン（ＣＤ９、ＣＤ６３、およびＣＤ８１）、脂肪酸シンターゼ、フェツインＡ、フロチリン－１、フロチリン－２、フルクトース二リン酸アルドラーゼＡ、グリセリンアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、グリコホリンＡ、ＧＰＣ１、ＧＰＩアンカー５’ヌクレオチダーゼ、ＧＴＰアーゼ、熱ショックタンパク質８（ＨＳＰＡ８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ヘパリナーゼ、ヘテロ三量体Ｇタンパク質、ＨＩＶＧａｇ、ＨＩＶＮｅｆ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＳＶｇＢ、ＨＴＬＶ－１Ｔａｘ、ハンチンチン、ＩＣＡＭ１、インテグリン、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ１／２、ロイシンリッチ受容体キナーゼ２、Ｌ－乳酸デヒドロゲナーゼＡ鎖、リソソーム関連膜糖タンパク質１、リソソーム関連膜糖タンパク質２、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＵＣ１、多剤耐性関連タンパク質、筋肉ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ２）、Ｎ－カドヘリン、ＮＫＣＣ２、ＰＤＣＤ６ＩＰ／Ａｌｉｘ、ＰＥＣＡＭ１、ホスホグリセレートキナーゼ、胎盤プリオンタンパク質、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫＭ）、Ｒａｂ－１４、Ｒａｂ－５ａ、Ｒａｂ－５ｂ、Ｒａｂ－５ｃ、Ｒａｂ－７、Ｒａｐ１Ｂ、レジスチン、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ））、サバイビング（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）、シンデカン－１、シンデカン－４、シンテニン－１、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ２）、ＴＳＧ１０１、ＴＳＰＡＮ８、腫瘍関連糖タンパク質テトラスパニン－８、チロシン３－モノオキシゲナーゼ／トリプトファン５－モノオキシゲナーゼ活性化タンパク質、ＴＹＲＰ－２、液胞選別タンパク質３５、またはゼータポリペプチド（ＹＷＨＡＺ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ラクトアドヘリンを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＬＡＭＰ２、あるいはその変形またはフラグメントを含み、該ＬＡＭＰ２は、配列番号４のペプチド配列と少なくとも７０％同一である。いくつかの実施形態では、膜貫通部分は、ＣＤ６３、あるいはその変形またはフラグメントを含み、該ＣＤ６３は、配列番号５のペプチド配列と少なくとも７０％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤ６３は、修飾されたＣＤ６３である。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、トランケートされたＣＤ６３である。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、少なくとも１つの追加のＣＤ６３膜貫通ドメインを含むように修飾される。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、１つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、２つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、３つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、４つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＤ６３は、５つの膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３の細胞外ループにおいて、修飾されたＣＤ６３と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント部分は、修飾されたＣＤ６３の大型細胞外ループにおいて、修飾されたＣＤ６３と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、前記組成物は、標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、サイトカインを標的とするペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、癌細胞マーカーを標的とするペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、融合性部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、融合性部分は、ウイルス融合性部分を含む。いくつかの実施形態では、融合性部分は、哺乳動物融合性部分を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、免疫回避部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫回避部分は、ＣＤ４７を含む。前記組成物は、除核細胞を含まない。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、エキソソーム、微小小胞体、レトロウイルス様粒子、アポトーシス小体、アポプトソーム、オンコソーム、エキソファー（ｅｘｏｐｈｅｒ）、外膜ウイルス、エキソマー（ｅｘｏｍｅｒｅ）、またはその他非常に大きな細胞外小胞を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、エキソソームを含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、複数の免疫チェックポイント部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも１０，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも９，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも８，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも７，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも６，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも５，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、１００ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも３，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも２，５００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも２，０００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、細胞外小胞１つにつき少なくとも１，５００ユニットの免疫チェックポイント部分を含み、５０ｎｍの直径を含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、複数のエキソソームを含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、治療上有効量のエキソソームを含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０＾６のエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０＾７のエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０＾８のエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも
１００μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２００μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５００μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも７５０μｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも３ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも４ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも６ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも７ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも１００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも２００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも３００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも４００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも５００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも６００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、少なくとも７００ｍｇのエキソソームをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記組成物は、細胞由来である。いくつかの実施形態では、前記組成物は、冷凍保存される。いくつかの実施形態では、前記組成物は、凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、前記組成物は、３７℃で２４時間安定している。いくつかの実施形態では、前記組成物は、３７℃で４８時間安定している。いくつかの実施形態では、前記組成物は、３７℃で７２時間安定している。
【０００６】
本開示の他の態様は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの細胞外小胞またはエキソソームを生成するように構成された細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記細胞は幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は非ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は間葉系幹細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は、遺伝的に修飾された細胞である。いくつかの実施形態では、前記細胞は、本明細書に記載の実施形態のいずれか１つに記載される細胞外小胞またはエキソソームを産生するために遺伝的に修飾される。
【０００７】
本開示の他の態様は、１つ以上の免疫チェックポイント部分を発現するように構成された細胞外小胞を精製する方法を含み、該方法は、細胞外小胞の異種集団を得る工程と、前記免疫チェックポイント部分との複合体を形成するために、前記細胞外小胞の異種集団を、検出部分を含む検出アッセイ溶液にさらす工程と、前記免疫チェックポイント部分と前記検出部分との間に形成される複合体から生じるシグナルを検出する工程であって、前記シグナルの強度は、発現した免疫チェックポイント部分のユニットに比例する、工程と、前記シグナルの強度に基づき前記細胞外小胞の亜集団を単離する工程とを含む。いくつかの実施形態では、検出部分は抗体を含む。いくつかの実施形態では、検出部分は、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４、またはこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、検出部分は、免疫チェックポイント部分のリガンドを含む。いくつかの実施形態では、検出アッセイ溶液は、前記免疫チェックポイント部分に結合するよう構成されたペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、前記免疫チェックポイント部分に結合するように構成されたペプチドは、ＰＤ－１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはこれらの組合せを含む。
【０００８】
本開示の他の態様は、本明細書に記載の実施形態のいずれか１つの組成物を含む医薬組成物を含んでいる。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、少なくとも１つの追加の活性薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、鞘内投与、眼内投与、硝子体内投与、網膜投与、静脈内投与、筋肉内投与、脳室内投与、大脳内投与、小脳内投与、側脳室内投与、実質内投与、皮下投与、またはこれらの組合せのために製剤化される。
【０００９】
本開示の他の態様は、自己免疫疾患を処置する方法を含み、該方法は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、１型糖尿病、多発性硬化症、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、グレーブス病、若年性関節炎、慢性ライム病、視神経炎、乾癬性関節炎、強膜炎、強皮症、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、ブドウ膜炎、炎症性眼疾病、白斑、ＣＯＰＤ、臓器移植由来の合併症、または移植片対宿主病である。いくつかの実施形態では、前記自己免疫性疾患は、関節リウマチである。
【００１０】
本開示の他の態様は、必要とする患者のＣＤ８＋ＣＤ２５＋細胞を抑制する方法を含み、該方法は、本明細書に記載の実施形態のうちいずれか１つの組成物を投与する工程を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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