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公開番号2025170352
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-11-18
出願番号2025138884,2022176178
出願日2025-08-22,2017-04-14
発明の名称ムコ多糖症II型を処置するための遺伝子療法
出願人ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア
代理人弁理士法人小田島特許事務所
主分類A61K 35/76 20150101AFI20251111BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】ハンター症候群及びハンター症候群に関連する症状の処置を提供する。
【解決手段】hIDS遺伝子を含む発現カセットのAAV9媒介性くも膜下腔内及び/または全身送達に有用な懸濁液が提供される。これらのベクター及び組成物を含む方法及びキットもまた提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
製剤緩衝液中の複製欠損組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）の懸濁液を含む、ヒト対象におけるくも膜下腔内投与に適した薬学的組成物であって、
（ａ）前記ｒＡＡＶは、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージされたヒトイズロネート－２－スルファターゼ（ｈＩＤＳ）をコードする異種核酸を含み；
（ｂ）前記製剤緩衝液は、生理学的に適合する水性緩衝液、及び任意のサーファクタント及び賦形剤を含み；かつ
（ｃ）（ｉ）前記ｒＡＡＶのゲノムコピー（ＧＣ）力価が少なくとも１．０×１０
１３
ＧＣ／ｍｌ（＋／－２０％）であるか；及び／または
（ｉｉ）前記ｒＡＡＶの空粒子／全粒子比が、空のキャプシドを少なくとも約８０％含まないか；及び／または
（ｉｉｉ）少なくとも約２．５×１０
１０
ＧＣ／ｇ脳質量～約３．６×１０
１１
ＧＣ／ｇ脳質量の前記ｒＡＡＶの懸濁液の用量が力価を有する、前記薬学的組成物。
続きを表示（約 980 文字）【請求項２】
力価がインビトロアッセイによって測定される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記インビトロアッセイが、１細胞あたりの既知の多重度のｒＡＡＶＧＣ力価を用いてＨＥＫ２９３細胞に形質導入すること、及び４ＭＵ－イズロニド酵素アッセイを用いて形質導入７２時間後のｈＩＤＳ活性について上清をアッセイすることを包含する、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記ｒＡＡＶが、空粒子／全粒子比が０．０１～０．０５（空のキャプシドを９５～９９％含まない）である、請求項１～３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記コードされたｈＩＤＳが、以下から選択される配列を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の薬学的組成物：
（ａ）配列番号２のアミノ酸１～約５５０（ＧｅｎｂａｎｋＮＰ＿０００１９３）；及び
（ｂ）配列番号２の約２１～約５５０のアミノ酸に融合された異種リーダー配列を含む合成ヒト酵素；
（ｃ）配列番号２の約２１～約４５５のアミノ酸に融合された異種リーダー配列を含む合成ヒト酵素；
（ｄ）配列番号２の約３４～約５５０のアミノ酸に融合された異種リーダー配列を含む合成ヒト酵素；または
（ｄ）配列番号２の約３４～約４５５のアミノ酸に融合された異種リーダー配列を含む合成ヒト酵素。
【請求項６】
前記ｒＡＡＶが、５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列、ＣＢ７プロモーター、ニワトリベータアクチンイントロン、ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナル、及び／または３’ＩＴＲ配列をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記ＡＡＶＩＴＲがＡＡＶ９に対して異種である、請求項６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＩＴＲがＡＡＶ２由来である、請求項７に記載の薬学的懸濁液。
【請求項９】
前記懸濁液が６～９のｐＨを有する、請求項１～８のいずれか１項に記載の薬学的懸濁液。
【請求項１０】
前記懸濁液が６．８～７．８のｐＨを有する、請求項９に記載の薬学的懸濁液。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
連邦政府支援の研究に関する声明
本発明は、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ（国立衛生研究所）からの助成金番号Ｒ０１ＤＫ５４４８１、Ｐ４０ＯＤ０１０９３９、及びＰ３０ＥＳ０１３５０８の下で政府支援によってなされた。連邦政府はこの発明において、一定の権利を有し得る。
続きを表示（約 2,500 文字）【０００２】
電子資料の参照による組み込み
出願人は、ファイル番号「ＵＰＮ－１６－７７７１ＰＣＴ＿ＳＴ．２５」で本明細書とともに電子的に提出されている配列表を参照として組み込む。
【０００３】
１．序文
本発明は、ハンター症候群としても公知のムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳＩＩ）を処置するための遺伝子治療アプローチに関する。
【背景技術】
【０００４】
２．発明の背景
ハンター症候群としても公知のＭＰＳＩＩは、主に男性、１０万人に１人から１７万人に１人が罹患する希なＸ連鎖劣性遺伝病である。この進行性でかつ悲惨な疾患は、ＩＤＳ遺伝子の変異によって引き起こされ、ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸のリソソーム異化に必要な酵素であるリソソーム酵素、イズロネート－２－スルファターゼの欠乏に至る。ＧＡＧ（グリコサミノグリカン）と呼ばれるこれらの遍在性多糖類は、ＭＰＳＩＩ患者の組織及び器官に蓄積し、特徴的な蓄積病変及び多様な疾患の後遺症を生じる。この患者集団では罹患率及び死亡率が高く－重度の表現型（神経認知機能低下を特徴とする）の患者では、平均年齢１１．７歳で死亡が報告されており；軽度または弱化した表現型の患者では、２１．７歳で死亡が報告されている。
【０００５】
ＭＰＳＩＩの患者は出生時には正常であるように見えるが、疾患の徴候及び症状は、典型的には１８ヶ月～４歳の年齢の間に重度の形態で存在し、４～８年の間に弱化した形態で存在する。罹患した全ての患者に共通する徴候及び症状としては、低身長、粗い顔貌、大頭症、巨大舌、難聴、肝腫脹及び脾腫、多発異骨症、関節拘縮、脊髄狭窄及び手根管症候群が挙げられる。頻繁な上気道及び耳の感染症がほとんどの患者で起こり、進行性気道閉塞が一般的に見出され、睡眠時無呼吸及びしばしば死につながる。心臓病はこの集団における主要な死因であり、左右の心室肥大及び心不全をもたらす弁膜機能障害を特徴とする。死亡は、一般に、閉塞性気道疾患または心不全に起因する。
【０００６】
重篤な形態の疾患では、早期発達のマイルストーンが達成される可能性があるが、発達遅延は１８～２４ヶ月で容易に明らかである。一部の患者は初年度にスクリーニング検査の聴取を受けず、サポートされずに座る能力、歩く能力、会話を含む他のマイルストーンが遅れる。発達の進行は約６．５年の間プラトーになり始める。ＭＰＳＩＩの小児の半数はトイレ訓練を受けているが、大部分の子どもたちは、全員ではないにしても、病気の進行とともにこの能力を失う。
【０００７】
有意な神経学的関与を有する患者は、過活動、頑固さ及び攻撃を含む重度の行動障害を示し、これは生後２年目から始まり、神経変性がこの行動を減弱させる８～９歳まで続く。
【０００８】
てんかん発作は、１０歳に達した重症患者の半分超で報告され、死亡するまでにＣＮＳの関与するほとんどの患者が重度の精神的な障害を有し、絶えずケアを必要とする。弱化した病気の患者は正常な知的機能を発揮するが、ＭＲＩ画像では、白質病変、拡大した脳室及び脳萎縮を含む、ＭＰＳＩＩを有するすべての患者において全体的な脳の異常が明らかになる。
【０００９】
組換えイデュルスルファーゼ（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）、ＳｈｉｒｅＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃＴｈｅｒａｐｉｅｓ）を用いた酵素補充療法（「ＥＲＴ」）は、ハンター症候群の唯一承認された処置であり、毎週の輸液として投与される。しかし、現在投与されているＥＲＴは、血液脳関門（「ＢＢＢ」）を通過しないため、重篤な疾患の患者、すなわちＣＮＳ／神経認知及び行動関与を伴うＭＰＳＩＩの満たされていないニーズに対処し得ない。この問題に対処する現在の労力は、ＢＢＢを横切ることが可能なように酵素を改変することを目的としている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
３．発明の要旨
ハンター症候群としても公知のＭＰＳＩＩと診断された患者（ヒト対象）のＣＮＳにヒトイズロネート－２－スルファターゼ（ｈｕｍａｎｉｄｕｒｏｎａｔｅ－２－ｓｕｌｆａｔａｓｅ）（「ｈＩＤＳ」）遺伝子を送達するための複製欠損アデノ随伴ウイルス（「ＡＡＶ」）の使用が、本明細書で提供される。ｈＩＤＳ遺伝子を送達するために使用される組換えＡＡＶ（「ｒＡＡＶ」）ベクター（「ｒＡＡＶ．ｈＩＤＳ」）は、ＣＮＳ（例えば、ＡＡＶ９キャプシドを保有するｒＡＡＶ）に対して指向性を有するべきであり、ｈＩＤＳ導入遺伝子は、特定の発現制御エレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー及びニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）のハイブリッドによって制御されるべきである。くも膜下腔内／大槽内投与に適した薬学的組成物は、生理学的に適合性の水性緩衝液、サーファクタント及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液中のｒＡＡＶ．ｈＩＤＳベクターの懸濁液を含む。ｒＡＡＶ懸濁液は、さらに以下によって特徴付けられる：
（ｉ）ｒＡＡＶゲノムコピー（ＧＣ）力価が少なくとも１．０×１０
１３
ＧＣ／ｍｌ（＋／－２０％）である；
（ｉｉ）ｒＡＡＶの空粒子／全粒子比が、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析（実施例５Ｄ参照）で決定して０．０１～０．０５である（９５％～９９％が空のキャプシドなし）か、または他の実施形態では、少なくとも約５０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％が空のキャプシドなし；及び／または（ｉｉｉ）少なくとも約２．５×１０
１０
ＧＣ／ｇの脳質量～約３．６×１０
１１
ＧＣ／ｇ脳質量というｒＡＡＶ懸濁液の用量が力価を有する。
（【００１１】以降は省略されています）

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