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公開番号2025157275
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-15
出願番号2025108663,2021138882
出願日2025-06-27,2021-08-27
発明の名称抗SARS-CoV-2単ドメイン抗体
出願人株式会社プロテイン・エクスプレス
代理人弁理士法人平木国際特許事務所
主分類C07K 16/10 20060101AFI20251007BHJP(有機化学)
要約【課題】SARS-CoV-2に対する結合活性及び中和活性を有する単ドメイン抗体を提供する。
【解決手段】以下の(a)～(c)に記載のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、単ドメイン抗体:
(a)特定のアミノ酸配列を有するポリペプチド;
(b)前記(a)に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、ポリペプチド;
(c)前記(a)又は(b)に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含む、ポリペプチド。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、単ドメイン抗体：
（ａ）配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）への結合活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含み、かつ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＲＢＤへの結合活性を有する、ポリペプチド。
続きを表示（約 690 文字）【請求項２】
前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
（ｇ）配列番号９で示されるアミノ酸配列又は配列番号９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｈ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列又は配列番号１３で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｉ）配列番号１７で示されるアミノ酸配列又は配列番号１７で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防のために使用される、医薬組成物。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の単ドメイン抗体を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出試薬。
【請求項５】
試料と、請求項１又は２に記載の単ドメイン抗体とを接触させる工程を含む、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法。
【請求項６】
前記試料が、対象から取り出した試料である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記対象がヒトである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１又は２に記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防のために使用される、衛生用品。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和するための単ドメイン抗体に関する。
続きを表示（約 3,300 文字）【背景技術】
【０００２】
コロナウイルスは、ニドウイルス目コロナウイルス科オルソコロナウイルス亜科よりなるＲＮＡウイルスの一群である。コロナウイルスは、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノムと、らせん対称のヌクレオカプシドを持つエンベロープウイルスであり、カプシド表面からこん棒型の突起が突き出た特徴的な形状を有する。コロナウイルスは、ＲＮＡウイルスの中でも大型のウイルスであり、そのゲノムサイズは約２６～３２キロベースである。
【０００３】
コロナウイルスは、哺乳類、鳥類等に感染性疾患を引き起こすＲＮＡウイルスとして知られ、特に、軽度～重篤の気道感染症を引き起こすことが知られる。ヒトにおいては、コロナウイルスは、軽症の場合は一般的な風邪の原因ウイルス（風邪の原因ウイルスは、コロナウイルス以外にも多数知られる）となるが、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ等の一部のコロナウイルスは、より致命的な症状を引き起こすことが知られる。特に、２０１９年に中国で発見された新型コロナウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、短期間に全世界に蔓延し、有効な治療薬が存在しなかったという背景もあり、多数の感染者及び死者を出すこととなった。現在も、その数は増え続けており、早急にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療薬の開発と普及が達成されることが望まれている。
【０００４】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２には、そのウイルス表面に、宿主細胞の受容体に結合するスパイクタンパク質が存在する。このスパイクタンパク質は、三量体構造を有する糖タンパク質であり、各ポリペプチド鎖は、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）、Ｓ１ドメイン及びＳ２ドメインから構成される。Ｓ１ドメイン上の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）には、「ダウン型構造」と「アップ型構造」があり、アップ型構造のＲＢＤが宿主細胞表面のアンジオテンシン変異酵素ＩＩ（ＡＣＥ２）受容体に結合することが明らかにされている（非特許文献１）。
【０００５】
単ドメイン抗体は、重鎖のみで構成される抗体（免疫グロブリン）の可変領域からなる抗体であり、ラクダ科哺乳類でみられるＶＨＨ、サメ科でみられるＶＮＡＲが知られる。単ドメイン抗体は、単鎖抗体、ナノボディ（登録商標）とも称される。単ドメイン抗体は、通常の抗体と同様の抗原結合性を有する一方で、耐酸性や耐熱性に優れ、一度変性しても再度生理的な条件下におくことでその抗原結合性が復活することで知られる。単ドメイン抗体の分子量は１２～１５ｋＤａ程度であり、大腸菌、酵母等の組換え微生物による生産が比較的容易である。これらの特徴から、抗体医薬としての利用が期待されており、既に、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）を標的とする単ドメイン抗体を用いた後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）治療薬が市販されている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
D. Wrapp et al., Science, Vol. 367, pp. 1260-1263 (2020)
F. Peyvandi et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, Vol. 15, pp. 1448-1452 (2017)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
多くの機関でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症（Ｃｏｖｉｄ－１９）治療薬の開発が進められており、抗体医薬の実用化もなされているが、現在のところ、単ドメイン抗体を主成分とするＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症治療のための承認薬は存在しない。本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する結合活性及び中和活性を有する単ドメイン抗体を提供することを目的とする。また、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療及び／又は予防に有用な医薬組成物、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の診断補助に有用な、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する試薬及び方法、並びに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防に有効な衛生用品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本明細書によれば、以下の発明が提供される。
（１）以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、単ドメイン抗体：
（ａ）配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）への結合活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含み、かつ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＲＢＤへの結合活性を有する、ポリペプチド。
（２）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｇ）配列番号９で示されるアミノ酸配列又は配列番号９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｈ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列又は配列番号１３で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｉ）配列番号１７で示されるアミノ酸配列又は配列番号１７で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（３）（１）又は（２）に記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防のために使用される、医薬組成物。
（４）（１）又は（２）に記載の単ドメイン抗体を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出試薬。
（５）試料と、（１）又は（２）に記載の単ドメイン抗体とを接触させる工程を含む、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法。
（６）前記試料が、対象から取り出した試料である、（５）に記載の方法。
（７）前記対象がヒトである、（６）に記載の方法。
（８）（１）又は（２）に記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防のために使用される、衛生用品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する結合活性及び中和活性を有する単ドメイン抗体を提供することができる。また、本発明によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療及び／又は予防に有用な医薬組成物、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の診断補助に有用な、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する試薬及び方法、並びに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防に有効な衛生用品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
配列番号１～７で表されるアミノ酸配列を有するＶＨＨ抗体（Ａ０２、Ａ０３、Ａ１５、Ｂ０２、Ｂ０４、Ｂ１３及びＢ１６）のアラインメントを示す。
各抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＲＢＤＶＨＨ抗体のＲＢＤへの結合活性評価の結果を示すグラフである。試験はｎ＝４で実施した。使用した抗ＲＢＤＶＨＨ抗体のいずれもＲＢＤに対する結合活性を有することが確認された。特に、Ａ０２、Ａ０３及びＡ１５において高い結合活性が見られた。
各ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＲＢＤＶＨＨ抗体の中和活性評価の結果を示すグラフである。試験はｎ＝４で実施した。陽性対照区の平均吸光度をＡＣＥ２結合率１００％として、各測定区の平均吸光度よりＡＣＥ２結合率を算出した。実施例３で高いＲＢＤ結合活性を示したＡ０２、Ａ０３及びＡ１５で比較的高い中和活性が見られることが確認された。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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