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公開番号2025148345
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-10-07
出願番号2025097716,2021566507
出願日2025-06-11,2020-05-09
発明の名称修飾多能性細胞
出願人ザリージェンツオブザユニバーシティオブカリフォルニア,The Regents of the University of California
代理人個人
主分類C12N 5/10 20060101AFI20250930BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】人工多能性幹細胞、胚性幹細胞、及び低免疫多能性細胞を含み、ABO血液群O型リーサス因子陰性であり、且つ、血液型抗原不適合に起因する拒絶反応を回避する多能性細胞を提供する。
【解決手段】修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞であって、前記細胞が、ABO血液群O型及びリーサス因子陰性(Rh-)であり、前記細胞が、(a)A1、A2、及びBからなる群から選択されるABO血液群抗原が低減若しくは排除されており;並びに/又は(b)Rh C抗原、Rh E抗原、Kell K抗原(KEL)、Duffy(FY)Fya抗原、Duffy Fy3抗原、Kidd(JK)Jkb抗原、MNS抗原U、及びMNS抗原Sからなる群から選択されるRhタンパク質抗原発現が低減若しくは排除されている、修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞であって、前記細胞が、ＡＢＯ血液群Ｏ型及び
リーサス因子陰性（Ｒｈ－）であり、前記細胞が、（ａ）Ａ１、Ａ２、及びＢからなる群
から選択されるＡＢＯ血液群抗原が低減若しくは排除されており；並びに／又は（ｂ）Ｒ
ｈＣ抗原、ＲｈＥ抗原、ＫｅｌｌＫ抗原（ＫＥＬ）、Ｄｕｆｆｙ（ＦＹ）Ｆｙａ抗
原、ＤｕｆｆｙＦｙ３抗原、Ｋｉｄｄ（ＪＫ）Ｊｋｂ抗原、ＭＮＳ抗原Ｕ、及びＭＮＳ
抗原Ｓからなる群から選択されるＲｈタンパク質抗原発現が低減若しくは排除されている
、修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
続きを表示（約 2,100 文字）【請求項２】
修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞であって、（ａ）Ａ１、Ａ２、及びＢからなる
群から選択される１つ若しくは複数のＡＢＯ血液群抗原の抗原性を低減若しくは排除して
、前記細胞をＡＢＯ血液群Ｏ型にする修飾；並びに／又は（ｂ）ＲｈＣ抗原、ＲｈＥ
抗原、ＫｅｌｌＫ抗原（ＫＥＬ）、Ｄｕｆｆｙ（ＦＹ）Ｆｙａ抗原、ＤｕｆｆｙＦｙ
３抗原、Ｋｉｄｄ（ＪＫ）Ｊｋｂ抗原、ＭＮＳ抗原Ｕ、及びＭＮＳ抗原Ｓからなる群から
選択される１つ若しくは複数のＲｈ抗原の抗原性を低減若しくは排除して、前記細胞をＲ
ｈ－にする修飾を含む、修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
【請求項３】
前記細胞が、以下：
ａ．非修飾多能性細胞と比較して、低減した内在性主要組織適合性抗原クラスＩ（ＨＬ
Ａ－Ｉ）機能；
ｂ．非修飾多能性細胞と比較して、低減した内在性主要組織適合性抗原クラスＩＩ（Ｈ
ＬＡ－ＩＩ）機能；及び
ｃ．ＮＫ細胞殺傷に対する感受性を低減する、増大したＣＤ４７機能
を含む低免疫原性（ＨＩＰ）多能性細胞である、請求項１又は２に記載の修飾多能性細胞
。
【請求項４】
修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞であって、前記細胞が、ＨＬＡ－Ｉヒト白血球
抗原、ＨＬＡ－ＩＩヒト白血球抗原、ＣＤ４７、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＮＬＲＣ５、Ｃ
ＩＩＴＡ、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、Ｐ
Ｄ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４－Ｉｇ、ＣＤ４７、Ｃｌ－阻害因子、ＩＬ－３５、ＲＦＸ－５、
ＲＦＸＡＰ、ＲＦＸＡＮＫ、ＮＦＹ－Ａ、ＮＦＹ－Ｂ、ＮＦＹ－Ｃ、ＩＲＦ－１、ＯＸ４
０、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＨＶ
ＥＭ、ＳＬＡＭ、ＣＤ２２６、ＰＤ１、ＣＴＬ４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、Ｃ
Ｄ１６０、ＢＴＬＡ、ＣＤ２４４、ＣＤ３０、ＴＬＴ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、ＰＤ－
Ｌ２、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ５８、ＩＣＡＭ－３、ＴＣＲＡ、ＴＣＲＢ、ＦＯＸＰ３
、ＨＥＬＩＯＳ、ＳＴ２、ＰＣＳＫ９、ＡＰＯＣ３、ＣＤ２００、ＦＡＳＬＧ、ＣＬＣ２
１、ＭＦＧＥ８、ＳＥＲＰＩＮＢ９、ＴＧＦβ、ＣＤ７３、ＣＤ３９、ＬＡＧ３、ＩＬ
１Ｒ２、ＡＣＫＲ２、ＴＮＦＲＳＦ２２、ＴＮＦＲＳＦ２３、ＴＮＦＲＳ１０、ＤＡＤ１
、及び／又は野生型幹細胞に関連するＩＦＮγＲ１ｄ３９のうち１つ若しくは複数の、モ
ジュレートされた発現を含み、ここで、前記細胞は、ＡＢＯ血液群Ｏ型又はリーサス因子
陰性（Ｒｈ－）である、修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
【請求項５】
修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞であって、前記細胞が、以下：
ａ．非修飾多能性細胞と比較して、低減した内在性主要組織適合性抗原クラス（ＨＬＡ
－Ｉ）機能；
ｂ．非修飾多能性細胞と比較して、低減した内在性主要組織適合性抗原クラス（ＨＬＡ
－ＩＩ）機能；
ｃ．ＮＫ細胞殺傷に対する感受性を低減する、増大したＣＤ４７機能；
ｄ．ＡＢＯ血液群Ｏ型（Ｏ）；並びに
ｅ．任意選択で、リーサス因子陰性（Ｒｈ－）血液型
を含む、Ｏ－低免疫原性多能性（ＨＩＰＯ－）細胞である、修飾多能性細胞又はそれに由
来する細胞。
【請求項６】
前記細胞が、Ｏ－人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣＯ－）、Ｏ－胚性幹細胞（ＥＳＣＯ－）
、Ｏ－内皮細胞、Ｏ－心筋細胞、Ｏ－肝細胞、Ｏ－ドーパミン作動性ニューロン、Ｏ－膵
島細胞、Ｏ－網膜色素内皮細胞、並びに、Ｏ－キメラ抗原受容体（Ｏ－ＣＡＲ）細胞を含
め、移植及び医学的療法に用いられるその他のＯ－細胞型から選択される、請求項１～５
のいずれか１項に記載の修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
【請求項７】
前記Ｏ－ＣＡＲ細胞が、Ｏ－キメラ抗原受容体Ｔ（Ｏ－ＣＡＲ－Ｔ）細胞である、請求
項６に記載の修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
【請求項８】
前記ＡＢＯ血液群Ｏ型が、低減したＡＢＯ血液群タンパク質発現によって得られる、請
求項１～７のいずれか１項に記載の修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
【請求項９】
前記ＡＢＯ血液群Ｏ型が、前記ＡＢＯ遺伝子のヒトエキソン７の破壊によって得られる
、請求項８に記載の修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
【請求項１０】
前記ＡＢＯ血液群Ｏ型が、前記細胞の表面でのＡＢＯ遺伝子産物の酵素修飾によって得
られる、請求項１～７のいずれか１項に記載の修飾多能性細胞又はそれに由来する細胞。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
Ｉ．関連出願の相互参照
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に従って、２０１９年５月１０日に出願さ
れた米国仮特許出願第６２／８４６，３９９号明細書、及び２０１９年５月３１日に出願
された米国仮特許出願第６２／８５５，４９９号明細書に対する優先権を主張し、これら
の各々は、その全体を参照により本明細書に組み込むものとする。
続きを表示（約 3,200 文字）【０００２】
ＩＩ．発明の分野
本発明は、再生細胞療法に関する。一部の実施形態では、再生細胞療法は、細胞株を、
それを必要とする患者に移植することを含む。一部の実施形態では、細胞株は、ＯＲｈ
－低免疫原性多能性細胞を含む。一部の実施形態では、再生細胞療法は、細胞移植片レシ
ピエントの免疫系が、同種異系材料を拒絶する傾向を低減する。一部の実施形態では、再
生細胞療法は、傷害を受けた臓器及び組織の治療に使用される。一部の実施形態では、再
生細胞療法は、心筋梗塞後の損傷組織を回復させるために使用される。
【背景技術】
【０００３】
ＩＩＩ．発明の背景
再生細胞療法は、傷害を受けた臓器及び組織を再生させるための重要且つ有望な治療法
である。移植用の臓器が入手困難であること、並びにそれに伴う長い待ち時間のために、
容易に入手できる細胞株を患者に移植することによる組織再生の可能性は、当然のことな
がら魅力的である。再生細胞療法は、動物モデル（例えば、心筋梗塞後の）への移植後に
、損傷組織を再生するのに見込みのある初期結果を示している。しかし、移植片レシピエ
ントの免疫系が、同種異系材料を拒絶する傾向は、治療薬の潜在的有効性を大幅に低下さ
せ、そうした治療法に関連する、起こり得るプラスの効果を低減する。
【０００４】
自家人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）は、理論的には、患者特異的細胞ベースの臓器修復
戦略のための無制限の細胞供給源となる。しかし、それらの作製には、技術的及び製造上
の課題があり、工程は時間がかかるため、概念上、あらゆる急性治療法が妨げられる。同
種異系ｉＰＳＣベースの治療法又は胚性幹細胞ベースの治療法は、製造の観点から、より
容易であり、良く分別され、標準化された、高品質細胞産物の作製を可能にする。多能性
幹細胞は、３つの胚葉の全ての細胞型に分化することができるため、幹細胞療法の潜在的
用途は多岐にわたる。分化し続けて、移植部位の臓器環境中で成熟する前駆細胞を移植す
ることにより、エクスビボ又はインビボで分化を実施することができる。エクスビボ分化
によって、研究者又は臨床医は、処置を綿密にモニターして、移植の前に適切な細胞集団
が産生されることを確実にすることができる。しかし、同種異系起源であるために、そう
した細胞産物は、拒絶反応を受ける可能性がある。
【０００５】
当技術分野では、異常細胞又は欠損細胞を再生若しくは置換するのに用いられる細胞を
産生することができる幹細胞が求められている。多能性幹細胞（ＰＳＣ）は、それらが急
速に増殖し、多くの潜在的細胞型に分化するために、使用され得る。ＰＳＣのファミリー
は、様々な技術により作製され、異なる免疫原的特徴を有するいくつかのメンバーを含む
。ＰＳＣ由来の操作細胞又は組織との患者の適合性によって、免疫拒絶反応のリスク及び
免疫抑制の必要性が決定される。
【０００６】
胚盤胞の内部細胞塊から単離された胚性幹細胞（ＥＳＣ）は、レシピエントとのミスマ
ッチである組織適合性抗原を提示する。この免疫学的障壁は、ＥＳＣのヒト白血球抗原（
ＨＬＡ）型バンクでは解決することができない。というのは、ＨＬＡ適合ＰＳＣ移植片で
あっても、マイナー抗原として機能する非ＨＬＡ分子中のミスマッチのために、拒絶反応
を受けるからである。これはまた、同種異系人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）についても当
てはまる。
【０００７】
拒絶反応の問題を回避するために、患者特異的多能性幹細胞を作製するための様々な技
術が開発されている。これらは、除核卵母細胞への体細胞核の移植（体細胞核移植（ＳＣ
ＮＴ）幹細胞）、体細胞とＥＳＣの融合（ハイブリッド細胞）、及び特定の転写因子を用
いた体細胞のリプログラミング（人工ＰＳＣ又はｉＰＳＣ）を含む。しかしながら、ＳＣ
ＮＴ幹細胞及びｉＰＳＣは、染色体同一性にもかかわらず、それぞれ核又は細胞ドナーと
免疫不適合性を有し得る。ＳＣＮＴ幹細胞は、卵母細胞から伝達されたミトコンドリアＤ
ＮＡ（ｍｔＤＮＡ）を担持する。ｍｔＤＮＡコード化タンパク質は、関連マイナー抗原と
して作用して、拒絶反応をトリガーし得る。ＤＮＡ及びｍｔＤＮＡ突然変異並びにｉＰＳ
Ｃのリプログラミング及び培養増殖に関連する遺伝的不安定性も免疫拒絶反応に関連する
マイナー抗原を生成し得る。このハードルが、ＳＣＮＴ幹細胞又はｉＰＳＣを用いた適合
性患者特異的組織の大規模操作の成功の可能性を低くしている。
【０００８】
さらに近年では、宿主同種異系免疫系による拒絶反応を回避する低免疫多能性（ＨＩＰ
）細胞の出現が、同種異系移植に関して大きな成功を収めている。国際公開第２０１８／
１３２７８３号パンフレットを参照されたい。これらの細胞は、ＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－
ＩＩ発現を低減することにより免疫応答の開始を回避すると共に、ＣＤ４７の産生を増大
させて食作用性自然免疫監視を抑制するために、操作される。本明細書に記載される発明
は、この技術を基礎として、ＨＩＰ細胞拒絶反応をさらに低減する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＩＶ．発明の概要
これまで認識されていなかった移植細胞拒絶反応の原因は、血液型抗原と関係していた
。血液産物は、ヒトの身体中の全ての赤血球の表面上の抗原の存在又は非存在によって、
異なる型に分類することができる（ＡＢＯ血液型）。Ａ、Ｂ、ＡＢ、及びＡ１抗原は、赤
血球の糖タンパク質上のオリゴ糖の配列により決定される。血液型抗原群の遺伝子は、抗
原タンパク質を作製するための指示を提供する。血液型抗原タンパク質は、赤血球の細胞
膜内で多様な機能を果たす。こうしたタンパク質機能としては、他のタンパク質及び分子
の細胞内及び細胞外への輸送、細胞構造の維持、他の細胞及び分子への接着、並びに化学
反応への参加が挙げられる。
【００１０】
リーサス因子（Ｒｈ）血液型は、ＡＢＯ血液型系に次ぐ、第２の最も重要な血液型系で
ある。Ｒｈ血液型系は、４９の規定血液型抗原から構成され、そのうち、５つの抗原、Ｄ
、Ｃ、ｃ、Ｅ、及びｅが、最も重要である。個体のＲｈ（Ｄ）ステータスは、通常、ＡＢ
Ｏ型の後に陽性又は陰性の接尾辞を付けて表される。「Ｒｈ因子」、「Ｒｈ陽性」、及び
「Ｒｈ陰性」という用語は、Ｒｈ（Ｄ）抗原だけを指す。Ｒｈ抗原に対する抗体は、溶血
性輸血反応に関与する可能性があり、Ｒｈ（Ｄ）及びＲｈ（ｃ）抗原に対する抗体は、胎
児及び新生児の溶血性疾患の重大なリスクをもたらす。ＡＢＯ抗体は、全てのヒトにおい
て若年期に発生する。しかし、Ｒｈ－ヒトのリーサス抗体は、人が感作された場合にのみ
発生する。これは、ｒｈ＋新生児の出産によるか、又はＲｈ＋血液の輸血を受けることに
よって起こる。
【課題を解決するための手段】
（【００１１】以降は省略されています）

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