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公開番号2025036069
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-14
出願番号2024075515
出願日2024-05-07
発明の名称アナステリンバイオマーカー
出願人ノルディックバイオサイエンスエー/エス
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/18 20060101AFI20250306BHJP(有機化学)
要約【課題】生体試料中のアナステリンを検出するための競合イムノアッセイ、及び特発性肺線維症(IPF)に関連する状態を有する患者を同定する方法を提供する。
【解決手段】フィブロネクチンの第1のタイプIIIドメイン中の隠れたドメインの一部である、アナステリンネオエピトープN末端アミノ酸配列PIQWNAPQPS(配列番号1)を特異的に認識する、モノクローナル抗体、及びイムノアッセイの方法であって、i)N末端アミノ酸配列PIQWNAPQPS(配列番号1)に特異的に結合するモノクローナル抗体と患者試料を接触させること;ならびにii)前記試料中の前記モノクローナル抗体とペプチドの間の結合の量を検出し決定することを含む、方法が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）を特異的に認識する、モノクローナル抗体。
続きを表示（約 1,000 文字）【請求項２】
前記Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）に特異的に結合しかつＮ末端アミノ酸配列ＨＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号２）を有するペプチドには特異的に結合しない、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
前記Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）に特異的に結合しかつＮ末端アミノ酸配列ＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号３）を有するペプチドには特異的に結合しない、請求項１または２に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
前記Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）を有する合成ペプチドに対し産生される、請求項１から３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
イムノアッセイの方法であって、
ｉ）Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）に特異的に結合するモノクローナル抗体と患者試料を接触させること；ならびに
ｉｉ）前記試料中の前記モノクローナル抗体とペプチドの間の結合の量を検出し決定すること
を含む、方法。
【請求項６】
患者における線維性疾患またはその重症度の特定のレベルを検出するおよび／またはモニターするためのイムノアッセイの方法であり、
ｉｉｉ）正常な健康被験者と関連する値および／または既知の疾患重症度と関連する値および／または以前の時点で前記患者から得られた値および／または所定のカットオフ値と前記結合の量を相関させること
をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記線維性疾患が、特発性肺線維症である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記患者試料が、血液、血漿または血清から選択される、請求項５から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記モノクローナル抗体が、前記Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）に特異的に結合しかつＮ末端アミノ酸配列ＨＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号２）を有するペプチドには特異的に結合しない、請求項５から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記モノクローナル抗体が、前記Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）に特異的に結合しかつＮ末端アミノ酸配列ＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号３）を有するペプチドには特異的に結合しない、請求項５から９のいずれか一項に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体試料中のアナステリンを検出するための競合イムノアッセイ、および特発性肺線維症（ＩＰＦ）に関連する状態を有する患者を同定することにおけるその使用に関する。本発明はまた、競合イムノアッセイを実行するためのキットに関する。
続きを表示（約 2,200 文字）【０００２】
ＩＰＦは、健康に関連する生活の質への大きな影響および疾患の負担を伴う進行性間質性肺疾患であり、余命は、非処置のまま放置される場合、診断から２～３年である［１］。現在、２つの抗線維化処置の選択肢、ニンテダニブおよびピルフェニドンのみが、ＦＤＡにより承認されており、いずれも疾患の進行を完全に止めることはできない。
【０００３】
ＩＰＦの特徴は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質の沈着および再構築による肺間質の瘢痕化である［２］。ＥＣＭの遍在し豊富な成分は、全体で３つのドメインユニット；１２個のタイプＩ、２個のタイプＩＩ、および１５～１７個のタイプＩＩＩドメインからなる、高分子量で二量体の約５００～６００ｋＤａの糖タンパク質フィブロネクチン（ＦＮ）である［３］。各ドメインは、２つの逆平行βシートのモジュールであり、そこでタイプＩＩＩドメインは、外力が周囲のＥＣＭおよび細胞環境から適用されると延長し、部分的に広がることができる［４］。ＦＮの機械的伸展の際に、隠れたドメインが曝露されタンパク質相互作用または開裂に利用可能になり得る。アナステリンは、第１のタイプＩＩＩドメイン中の隠れたドメインの一部であり、生物活性を有する部位として示されている［５］。他のＦＮ分子との相互作用を可能にするＦＮの伸展およびその結果得られるアナステリンの曝露は、強化された接着性を有することが認められたいわゆるスーパーフィブロネクチンを生成する、ＦＮの原線維形成を誘導することが示されている［６］。さらに、アナステリンペプチドフラグメントは、Ｒａｓ/ＥＲＫ経路によりリゾリン脂質シグナル伝達を選択的に阻害することが示されている［７］。したがって、アナステリンは、ヒト癌の前臨床齧歯動物モデルにおける腫瘍増殖および転移を阻害でき、かつインビトロで内皮細胞微小血管の増殖を阻害できることが示されている［８］～［１０］。ＦＮの原線維形成に対しアナステリンが有する効果にも関わらず、線維症におけるアナステリンの役割は、ほとんど知られておらず、依然として調査を必要としている。さらに、循環するアナステリンと疾患状態または臨床パラメータの関係は、これまで調査されていない。
【０００４】
出願人は、アナステリンのネオエピトープを利用する、特定の競合イムノアッセイ、ＦＮ－ＡＮＡをデザインした。アナステリン由来ネオエピトープのレベルを、線維症、特にＩＰＦを有する患者を評価するために使用できる。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、ＦＮタンパク質のドメイン内のアナステリンのＮ末端のネオエピトープであるペプチドを特異的に認識しそれに結合する、モノクローナル抗体に向けられる。好ましくは、上記ネオエピトープは、アミノ酸配列ＮＨ
２
－ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）に含まれる。したがって、第１の態様において、本発明は、遊離Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）（すなわちＦＮ－ＡＮＡ標的配列）に特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。
【０００６】
第２の態様において、本発明はまた、生体試料においてアナステリン（ＦＮ－ＡＮＡ）を検出するためのイムノアッセイを提供する。その方法は、アナステリンのネオエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体と患者試料を接触させること、ならびに試料中のそのモノクローナル抗体とペプチドの間の結合の量を検出し決定することを含み、ここでネオエピトープは、アナステリンのＮ末端配列からなる。
【０００７】
好ましい実施形態において、イムノアッセイの方法は；
ｉ）Ｎ末端アミノ酸配列ＰＩＱＷＮＡＰＱＰＳ（配列番号１）（本明細書では「ＦＮ－ＡＮＡ」、または「ＦＮ－ＡＮＡ標的配列」とも呼ばれる）に特異的に結合するモノクローナル抗体と患者試料を接触させること；ならびに
ｉｉ）試料中の上記モノクローナル抗体とペプチドの間の結合の量を検出し決定すること
を含む。
【０００８】
好ましい実施形態において、イムノアッセイの方法は、患者におけるＩＰＦまたはその重症度の特定のレベルを検出するおよび／またはモニターするためのイムノアッセイの方法であり、その方法はさらに、上記結合の量を、正常な健康被験者と関連する値および／または既知の疾患重症度と関連する値および／または以前の時点での上記患者から得られた値および／または所定のカットオフ値と相関させることを含む。
【０００９】
好ましい実施形態において、患者試料は、ヒトの生物液試料である。好ましくは、試料は、血液ベースの試料、例えば血液（全血）、血漿または血清である。
【００１０】
第３の態様において、本発明は、それを必要とする患者における線維症、特にＩＰＦを処置する方法を提供し、方法は：
（ａ）患者由来の試料に対し本発明の第１の態様に従い線維症またはその重症度の特定のレベルを検出するためのイムノアッセイの方法を実行すること；および
（ｂ）患者が線維症またはその重症度の上記特定のレベルを有するとステップ（ａ）において決定される場合、線維症の処置のための治療を患者に投与すること
を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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