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公開番号2025032175
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-11
出願番号2024208739,2021549986
出願日2024-11-29,2020-02-26
発明の名称クラッベ病の治療に有用な組成物
出願人ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア
代理人弁理士法人小田島特許事務所
主分類A61K 38/47 20060101AFI20250304BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】クラッベ病患者に対する改善された治療を提供する。
【解決手段】組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)を含む組成物であって、前記rAAVが、(a)中枢神経系の細胞を標的とするAAVカプシドと、(b)(ii)ベクターゲノムであって、(i)シグナルペプチド、および特定のアミノ酸配列を有する成熟ヒトガラクトシルセラミダーゼのタンパク質をコードし、前記タンパク質の発現を指示する調節配列の制御下にある、ガラクトシルセラミダーゼのコード配列、ならびに(ii)前記ベクターゲノムを前記AAVカプシド中にパッケージングするのに必要なAAV逆位末端配列、を含む、ベクターゲノムと、を含み、前記ベクターゲノムが、前記AAVカプシド中にパッケージングされる、組成物が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を含む組成物であって、前記ｒＡＡＶが、
（ａ）中枢神経系の細胞を標的とするＡＡＶカプシドと、
（ｂ）（ｉｉ）ベクターゲノムであって、（ｉ）シグナルペプチド、および少なくとも配列番号１０のａａ４３～６８５のアミノ酸配列を有する成熟ヒトガラクトシルセラミダーゼのタンパク質をコードし、前記タンパク質の発現を指示する調節配列の制御下にある、ガラクトシルセラミダーゼのコード配列、ならびに（ｉｉ）前記ベクターゲノムを前記ＡＡＶカプシド中にパッケージングするのに必要なＡＡＶ逆位末端配列、を含む、ベクターゲノムと、を含み、前記ベクターゲノムが、前記ＡＡＶカプシド中にパッケージングされる、組成物。
続きを表示（約 810 文字）【請求項２】
前記ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶｈｕ６８カプシドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記コード配列が、配列番号１０の全長ヒトガラクトシルセラミダーゼのシグナルペプチドおよび成熟ヒトガラクトシルセラミダーゼのタンパク質（アミノ酸１～６８５）をコードする、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記コード配列が、外因性ペプチドのコード配列と配列番号９のヌクレオチド１２７～２０５５の核酸配列もしくはそれと９５％～９９．９％同一の配列とを有するか、または配列番号９のヌクレオチド１～２０５５のヌクレオチド配列もしくはそれと９５％～９９．９％同一の配列を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記コード配列が、配列番号１０の前記成熟ヒトガラクトシルセラミダーゼのタンパク質（アミノ酸４３～６８５）および中枢神経系のヒト細胞に好適な外因性シグナルペプチドをコードする、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記調節配列が、ベータアクチンプロモーター、イントロン、およびウサギグロビンポリＡを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記調節配列が、配列番号１３を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記調節配列が、配列番号１５を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記調節配列が、配列番号１６を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ベクターゲノムが、配列番号１９のｎｔ１９８～４１６８の配列を有するＣＢ７．ＣＩ．ｈＧＡＬＣ．ＲＢＧを含む、請求項１または２に記載の組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【背景技術】
【０００１】
パルボウイルスファミリーのメンバーであるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、約４．７キロ塩基（ｋｂ）の長さの一本鎖直鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）ゲノムを有する小さな非エンベロープ性の正二十面体ウイルスである。野生型ゲノムは、ＤＮＡ鎖の両端に逆位末端配列（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔｓ、ＩＴＲ）、ならびに２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）であるｒｅｐおよびｃａｐを含む。Ｒｅｐは、ＡＡＶの生活環に必要なｒｅｐタンパク質をコードする４つの重複遺伝子から構成され、ｃａｐは、カプシドタンパク質の重複ヌクレオチド配列であるＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含有し、自己集合して正二十面体対称のカプシドを形成する。
続きを表示（約 4,700 文字）【０００２】
複製欠陥ヒトパルボウイルスに由来する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターは、遺伝子送達に好適なビヒクルとして記載されている。典型的には、機能的なｒｅｐ遺伝子およびｃａｐ遺伝子がベクターから除去されると、複製欠陥ベクターが得られる。これらの機能は、ベクター産生システムの中で提供されるが、最終ベクターには存在しない。
【０００３】
これまで、ヒトまたは非ヒト霊長類（ＮＨＰ）から単離されたいくつかの異なる十分に特徴付けられたＡＡＶが存在している。異なる血清型のＡＡＶは、異なるトランスフェクション効率を示し、異なる細胞または組織に対して指向性（ｔｒｏｐｉｓｍ）を示すことが見出されている。多くの異なるＡＡＶ系統群（ｃｌａｄｅ）が、ＷＯ２００５／０３３３２１号に記載されており、その中には系統群Ｆが含まれ、ＡＡＶ９、ＡＡＶｈｕ３１、およびＡＡＶｈｕ３２という３つのメンバーのみを有することが特定されている。ＡＡＶ９の構造分析は、Ｍ．Ａ．ＤｉＭａｔｔｉａｅｔａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（Ｊｕｎｅ
２０１２）ｖｏｌ．８６ｎｏ．１２６９４７－６９５８．に提供されている。本論文では、ＡＡＶ９が（合計）６０コピーの３つの可変タンパク質（ｖｐ）を有することが報告され、それは、ｃａｐ遺伝子によってコードされ、重複配列を有する。これらには、ＶＰ１（８７ｋＤａ）、ＶＰ２（７３ｋＤａ）、およびＶＰ３（６２ｋＤａ）が含まれ、それぞれ、１：１：１０の予測された比率で存在する。ＶＰ３の配列全体は、ＶＰ２内にあり、ＶＰ２のすべては、ＶＰ１内にある。ＶＰ１は、固有のＮ末端ドメインを有する。精密化された座標および構造因子は、ＲＣＳＢＰＤＢデータベースから受入番号３ＵＸ１で入手可能である。
【０００４】
異なる組織を脱標的化または標的化するには、いくつかの異なるＡＡＶ９バリアントが操作されている。例えば、Ｎ．Ｐｕｌｉｃｈｅｒｉａ，“ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＬｉｖｅｒ－ｄｅｔａｒｇｅｔｅｄＡＡＶ９ＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒＣａｒｄｉａｃａｎｄＭｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒ”，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ，１９，ｎｏ．６，ｐ．１０７０－１０７８（Ｊｕｎｅ２０１１）を参照されたい。血液脳関門を横切って遺伝子を送達するためのＡＡＶ９バリアントの開発も報告されている。例えば、Ｂ．Ｅ．Ｄｅｖｅｒｍａｎｅｔａｌ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．２，ｐ２０４－２１１（ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｏｎｌｉｎｅ１Ｆｅｂ２０１６）ａｎｄＣａｌｔｅｃｈｐｒｅｓｓｒｅｌｅａｓｅ，Ａ．Ｗｅｔｈｅｒｓｔｏｎ，ｗｗｗ．ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ－ｃｅｎｔｒａｌ．ｃｏｍ／２０１６／０２／１０／ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ－ｄｅｌｉｖｅｒｙ－ｏｆ－ｇｅｎｅｓ－ｔｈｒｏｕｇｈ－ｔｈｅ－ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ－ｂａｒｒｉｅｒ／，ａｃｃｅｓｓｅｄ１０／０５／２０１６を参照されたい。また、ＷＯ２０１６／０４９２３０１およびＵＳ８，７３４，８０９も参照されたい。
【０００５】
ＡＡＶｈｕ６８は、天然源由来のカプシド遺伝子の増幅後に同定され、最近、新しいＡＡＶカプシドとして同定された。また、ＷＯ２０１８／１６０５８２も参照されたい。このＡＡＶは、ＡＡＶ９と同様に、系統群Ｆ内にある。
【０００６】
クラッベ病（Ｋｒａｂｂｅｄｉｓｅａｓｅ）（グロボイド細胞白質ジストロフィー、ＧＬＤ）は、加水分解酵素であるガラクトシルセラミダーゼ（ＧＡＬＣ）をコードする遺伝子の変異によって引き起こされる常染色体劣性のリソソーム蓄積症（ＬＳＤ）である（ＷｅｎｇｅｒＤ．Ａ．，ｅｔａｌ．（２０００）ＭｏｌＧｅｎｅｔＭｅｔａｂ．７０（１）：１－９）。この酵素は、ほぼ髄鞘のみに見られるガラクトシルセラミド（セラミド）およびガラクトシルスフィンゴシン（サイコシン）を含む特定のガラクト脂質の分解に関与している。クラッベ病では、ＧＡＬＣ欠損症は、リソソーム内のサイコシン（ただし、ガラクトシルセラミドではない）の毒性蓄積を引き起こす（Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍｅｔａｌ．，１９８０）。サイコシンの蓄積は、ミエリンを産生するＣＮＳのオリゴデンドロサイトおよびＰＮＳのシュワン細胞に対して、特に毒性があり、これらの細胞型の急速かつ広範な死をもたらす。ＣＮＳおよびＰＮＳの両方におけるミエリン分解は、反応性アストロサイトのグリオーシスおよび多核巨マクロファージ（「グロボイド細胞」）の浸潤を伴う（ＳｕｚｕｋｉＫ．（２００３）ＪＣｈｉｌｄＮｅｕｒｏｌ．１８（９）：５９５－６０３）。ガラクトシルセラミドは、主に別の酵素であるＧＭ１ガングリオシドβ－ガラクトシダーゼによる加水分解（ＫｏｂａｙａｓｈｉＴ．，ｅｔａｌ．（１９８５）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２６０（２８）：１４９８２－７）およびガラクトシルセラミド合成の停止に寄与するオリゴデンドロサイトの死（ＳｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍＬ．，ｅｔａｌ．（１９８０）ＪＬｉｐｉｄＲｅｓ．２１（１）：５３－６４）により、ＧＡＬＣ活性が不在の場合は蓄積しない。
【０００７】
現在、クラッベ病に対して利用可能な唯一の疾患修飾治療は、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）であり、これは、多くの場合、臍帯血移植（ＵＣＢＴ）、同種末梢血幹細胞、または同種骨髄によって提供される。ＨＳＣＴを使用した乳児性クラッベ病を有する患者の治療は、わずかに成功しただけであり、典型的には、１歳の誕生日を迎える前に症状を呈する。乳児性クラッベ病における明らかな症状の発症後に実施される場合、ＨＳＣＴは、最小限の神経学的改善のみを提供し、実質的に生存率を改善しない（ＥｓｃｏｌａｒＭ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２００５）ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．３５２（２０）：２０６９－８１）。ＨＳＣＴは、症候前患者で実施された場合に効果的であり得るが、それでも、運動転帰は悪い（ＥｓｃｏｌａｒＭ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２００５）ＮＥｎｇｌＪ
Ｍｅｄ．３５２（２０）：２０６９－８１、ＷｒｉｇｈｔＭ．Ｄ．，ｅｔａｌ．（２０１７）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．８９（１３）：１３６５－１３７２、ｖａｎｄｅｎＢｒｏｅｋＢ．Ｔ．Ａ．，ｅｔａｌ．（２０１８）ＢｌｏｏｄＡｄｖ．２（１）：４９－６０）。３０日齢前に移植を受けた乳児は、後に移植を受ける乳児と比較して、より良好な生存率および機能的転帰を有した（ＡｌｌｅｗｅｌｔＨ．，ｅｔａｌ．（２０１８）ＢｉｏｌＢｌｏｏｄＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔ．２４（１１）：２２３３－２２３８）。症候前の移植は、症状発症後の未治療のまたは治療された乳児性クラッベ病患者と比較して、顕著に良好な転帰をもたらすことが報告されており、進行性の中枢髄鞘形成、正常な受容言語、症状重症度の減衰、およびより長い生存期間を伴う（ＥｓｃｏｌａｒＭ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２００５）ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．３５２（２０）：２０６９－８１、ＤｕｆｆｎｅｒＰ．Ｋ．，ｅｔａｌ．（２００９）ＧｅｎｅｔＭｅｄ．１１（６）：４５０－４、ＷｒｉｇｈｔＭ．Ｄ．，ｅｔａｌ．（２０１７）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．８９（１３）：１３６５－１３７２）。それでも、症状の出現前に治療されたほとんどの小児は、身長および体重について平均をかなり下回ったままであり、軽度の痙攣から独立した歩行の不能にわたって進行性の粗大運動遅延を有する（ＥｓｃｏｌａｒＭ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２００５）ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ．３５２（２０）：２０６９－８１、ＤｕｆｆｎｅｒＰ．Ｋ．，ｅｔａｌ．（２００９
）ＧｅｎｅｔＭｅｄ．１１（６）：４５０－４）。一部の子供は、後天性小頭症、胃瘻造設の必要性、および構音障害を含む残存障害も有する（ＤｕｆｆｎｅｒＰ．Ｋ．，ｅｔａｌ．（２００９）ＧｅｎｅｔＭｅｄ．１１（６）：４５０－４）。さらに、ＨＳＣＴは、ＣＮＳ特異的疾患の病理にのみ影響を及ぼすように見える。末梢神経障害などのＰＮＳ病理に関連する臨床的特徴は、ＨＳＣＴの影響を受けないままである。これらの結果は、ＨＳＣＴの限界を強調するものであり、特に早期発症型では、疾患の急速な進行は、造血幹細胞が移植され、ＣＮＳに移行し、分化し、ＧＡＬＣ分泌および交差補正（すなわち、矯正細胞によって分泌される酵素がＧＡＬＣ欠損細胞によって取り込まれるプロセス）を通して治療効果がもたらされるのに必要な時間を上回る。
【０００８】
当該技術分野では、クラッベ病患者に対する改善された治療の必要性が、依然として存在する。
【発明の概要】
【０００９】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を含む組成物が提供され、中枢神経系の細胞を標的とするＡＡＶカプシドと、（ｉ）タンパク質の発現を指示する配列の制御下で、配列番号１０のアミノ酸配列を有する成熟ガラクトシルセラミダーゼタンパク質をコードするガラクトシルセラミダーゼのコード配列、および（ｉｉ）ベクターゲノムをＡＡＶカプシド中にパッケージングするために必要なＡＡＶ逆位末端反復を含むベクターゲノムと、を含み、ベクターゲノムが、ＡＡＶカプシド中にパッケージングされる。特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶｈｕ６８カプシドである。特定の実施形態では、コード配列は、配列番号９の核酸配列、またはそれと９５％～９９．９％同一の配列を有する。特定の実施形態では、コード配列は、配列番号１０の成熟タンパク質、および中枢神経系のヒト細胞に好適な外因性シグナルペプチドをコードする。特定の実施形態では、調節配列は、ベータアクチンプロモーター、イントロン、および／またはウサギグロビンポリＡを含む。特定の実施形態では、組成物は、ベクターゲノムＣＢ７．ＣＩ．ｈＧＡＬＣ．ｒＢＧを有するｒＡＡＶを含む。
【００１０】
特定の実施形態では、組換えアデノ随伴ウイルスが提供され、中枢神経系の細胞を標的とするＡＡＶカプシドと、（ｉ）成熟ガラクトシルセラミダーゼタンパク質の発現を指示する調節配列の制御下で、配列番号１０のアミノ酸配列を有する成熟ガラクトシルセラミダーゼタンパク質をコードするガラクトシルセラミダーゼのコード配列、および（ｉｉ）ベクターゲノムをＡＡＶカプシド中にパッケージングするために必要なＡＡＶ逆位末端配列を含むベクターゲノムと、を含む。特定の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶｈｕ６８カプシドである。特定の実施形態では、コード配列は、配列番号９の核酸配列、またはそれと９５％～９９．９％同一の配列を有する。特定の実施形態では、コード配列は、配列番号１０の成熟タンパク質、および中枢神経系のヒト細胞に好適な外因性シグナルペプチドをコードする。特定の実施形態では、調節配列は、ベータアクチンプロモーター、イントロン、および／またはウサギグロビンポリＡを含む。特定の実施形態では、ベクターゲノムは、ＣＢ７．ＣＩ．ｈＧＡＬＣ．ＲＢＧである。
（【００１１】以降は省略されています）

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