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公開番号2024165590
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-11-28
出願番号2023081904
出願日2023-05-17
発明の名称タンパク質、ポリヌクレオチド、組換えベクター、形質転換体、組成物、ポリエチレンテレフタレートの検出方法、及びポリエチレンテレフタレートの分解方法
出願人国立大学法人静岡大学
代理人弁理士法人太陽国際特許事務所
主分類C12N 15/55 20060101AFI20241121BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】PETへの結合性を有するタンパク質;前記タンパク質をコードするポリヌクレオチド;前記ポリヌクレオチドを含む組換えベクター及び形質転換体;前記タンパク質を含む組成物;並びにPETの検出方法及び分解方法を提供する。
【解決手段】配列番号1のアミノ酸配列に対してK13H、N15P、E22V、及びD24Gの変異を有するアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有し、かつ前記K13H、N15P、E22V、及びD24Gの変異を有するアミノ酸配列を含み、ポリエチレンテレフタレートへの結合能を有する、タンパク質;前記タンパク質をコードするポリヌクレオチド;前記ポリヌクレオチドを含む組換えベクター及び形質転換体;前記タンパク質を含む組成物;並びにPETの検出方法及び分解方法。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列に対してＫ１３Ｈ、Ｎ１５Ｐ、Ｅ２２Ｖ、及びＤ２４Ｇの変異を有するアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記Ｋ１３Ｈ、Ｎ１５Ｐ、Ｅ２２Ｖ、及びＤ２４Ｇの変異を有するアミノ酸配列を含み、
ポリエチレンテレフタレートへの結合能を有する、タンパク質。
続きを表示（約 460 文字）【請求項２】
６０℃でポリエチレンテレフタレートへの結合能を有する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
さらに標識物質を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項４】
前記標識物質が蛍光色素又は蛍光タンパク質である、請求項３に記載のタンパク質。
【請求項５】
さらに酵素ドメインを含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記酵素ドメインがポリエチレンテレフタレート分解酵素ドメインである、請求項５に記載のタンパク質。
【請求項７】
請求項１～６のいずれか１項に記載のタンパク質をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７に記載のポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
【請求項９】
請求項８に記載の組換えベクターを含む形質転換体。
【請求項１０】
請求項１～６のいずれか１項に記載のタンパク質を含む組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、タンパク質、ポリヌクレオチド、組換えベクター、形質転換体、組成物、ポリエチレンテレフタレートの検出方法、及びポリエチレンテレフタレートの分解方法に関する。
続きを表示（約 2,700 文字）【背景技術】
【０００２】
プラスチックによる環境汚染の解決や、持続可能な社会の構築が重要視されている。その中で、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）は国内で生産されているプラスチックの４％を占めており、飲料ボトルや衣類など身近なところで使用されている。また、エンジニアリングプラスチックとしてガラス繊維などとの複合材料も使用されている。
【０００３】
ＰＥＴの持続可能な利用を目的とした様々なＰＥＴ分解技術が報告されている。例えば、特許文献１～４では、ＰＥＴ分解酵素が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
国際公開第２０１９／１６８８１１号
特開２０１５－１１９６７０号公報
国際公開第２０１２／０９９０１８号
特表２０１９－５２７０６０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
使用されたプラスチックが環境中に流出することで微細化し、水中を漂っていることが知られている。このような環境中に漂うプラスチックは「マイクロプラスチック」と呼ばれる。環境汚染への対応のため、ＰＥＴを除去したり分解したりする技術が望まれる。ＰＥＴの検出、除去や分解には、ＰＥＴに結合可能な物質を用いることが有用であるが、これまでに、ＰＥＴに結合性を有する物質に関する知見は限られている。
上記事情に鑑み、本開示は、ＰＥＴへの結合性を有するタンパク質；前記タンパク質をコードするポリヌクレオチド；前記ポリヌクレオチドを含む組換えベクター及び形質転換体；前記タンパク質を含む組成物；並びにＰＥＴの検出方法及び分解方法を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するための手段は、以下の態様を含む。
＜１＞配列番号１のアミノ酸配列に対してＫ１３Ｈ、Ｎ１５Ｐ、Ｅ２２Ｖ、及びＤ２４Ｇの変異を有するアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有し、かつ前記Ｋ１３Ｈ、Ｎ１５Ｐ、Ｅ２２Ｖ、及びＤ２４Ｇの変異を有するアミノ酸配列を含み、
ポリエチレンテレフタレートへの結合能を有する、タンパク質。
＜２＞６０℃でポリエチレンテレフタレートへの結合能を有する、＜１＞に記載のタンパク質。
＜３＞さらに標識物質を含む、＜１＞又は＜２＞に記載のタンパク質。
＜４＞前記標識物質が蛍光色素又は蛍光タンパク質である、＜３＞に記載のタンパク質。
＜５＞さらに酵素ドメインを含む、＜１＞～＜４＞のいずれか１項に記載のタンパク質。
＜６＞前記酵素ドメインがポリエチレンテレフタレート分解酵素ドメインである、＜５＞に記載のタンパク質。
＜７＞＜１＞～＜６＞のいずれか１項に記載のタンパク質をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
＜８＞＜７＞に記載のポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
＜９＞＜８＞に記載の組換えベクターを含む形質転換体。
＜１０＞＜１＞～＜６＞のいずれか１項に記載のタンパク質を含む組成物。
＜１１＞＜３＞又は＜４＞に記載のタンパク質をポリエチレンテレフタレートへ接触させることと、前記標識物質を検出することと、を含む、ポリエチレンテレフタレートの検出方法。
＜１２＞＜６＞に記載のタンパク質をポリエチレンテレフタレートへ接触させることを含む、ポリエチレンテレフタレートの分解方法。
【発明の効果】
【０００７】
本開示によれば、ＰＥＴへの結合性を有するタンパク質；前記タンパク質をコードするポリヌクレオチド；前記ポリヌクレオチドを含む組換えベクター及び形質転換体；前記タンパク質を含む組成物；並びにＰＥＴの検出方法及び分解方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
ＰｆＣｈＢＤ２－ｆＡＤＬ－１ｅの遺伝子マップを示す。
バイオパニングの流れの概要を示す。
バイオパニングにおける２ラウンド目及び３ラウンド目での洗浄液（Ｗａｓｈ）と溶出液を植菌したカナマイシン５０μｇ／ｍＬ添加２×ＹＴ寒天培地に生じたコロニー数を示す。
ＰｆＣｈＢＤ２（ＰＤＢＩＤ：２ＣＷＲ）とＡｌｐｈａＦｏｌｄ２で予測されたＰｆＣｈＢＤ２－Ｋ２７０Ｔ－Ｎ２７２Ｐ－Ｅ２７９Ｌ－Ｄ２８１Ｒ、ＰｆＣｈＢＤ２－Ｋ２７０Ｐ－Ｅ２７９Ｌ－Ｄ２８１Ｗ、及びＰｆＣｈＢＤ２－Ｋ２７０Ｈ－Ｎ２７２Ｐ－Ｅ２７９Ｖ－Ｄ２８１Ｇ変異体の三次元構造を示す。斜線ハッチング部は変異を加えたＫ２７０、Ｎ２７２、Ｅ２７９、Ｄ２８１の位置を示す。ａ：全体の構造を示す。ｂ：変異箇所を拡大したものを示す。
ｓｔａｇＲＦＰ－ＰｆＣｈＢＤ２－ＴＥＶ－Ｈｉｓの遺伝子マップを示す。
ＰｆＣｈＢＤ２の野生型（ＷＴ）とＫ２７０Ｈ－Ｎ２７２Ｐ－Ｅ２７９Ｖ－Ｄ２８１Ｇ変異体におけるＰＥＴへの結合量を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本開示の実施形態を実施するための形態について詳細に説明する。但し、本開示の実施形態は以下の実施形態に限定されるものではない。以下の実施形態において、その構成要素（要素ステップ等も含む）は、特に明示した場合を除き、必須ではない。数値及びその範囲についても同様であり、本開示の実施形態を制限するものではない。
【００１０】
本開示において「工程」との語には、他の工程から独立した工程に加え、他の工程と明確に区別できない場合であってもその工程の目的が達成されれば、当該工程も含まれる。
本開示において「～」を用いて示された数値範囲には、「～」の前後に記載される数値がそれぞれ最小値及び最大値として含まれる。
本開示において要素が単数形で表記されている場合であっても、特に明示されているときを除き、技術的な矛盾が生じない限りは複数の存在を排除しない。
本開示中に段階的に記載されている数値範囲において、一つの数値範囲で記載された上限値又は下限値は、他の段階的な記載の数値範囲の上限値又は下限値に置き換えてもよい。また、本開示中に記載されている数値範囲において、その数値範囲の上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。
（【００１１】以降は省略されています）

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