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公開番号2024118905
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-09-02
出願番号2023025479
出願日2023-02-21
発明の名称AVP受容体及びその利用
出願人ヤマサ醤油株式会社,国立大学法人東北大学
代理人弁理士法人特許事務所サイクス
主分類C07K 14/72 20060101AFI20240826BHJP(有機化学)
要約【課題】1-デアミノ-8-D-アルギニンバソプレシン(DDAVP)の影響を排除してアルギニンバソプレシンを測定する方法を提供する。
【解決手段】特定のアミノ酸配列からなり、かつアルギニンバソプレシン(AVP)受容体活性を有するタンパク質、該タンパク質をコードするポリヌクレオチド、該タンパク質を発現する培養細胞、該培養細胞を含有する、AVP測定用キット、および該培養細胞を用いる試料中のAVPレベルの分析方法を提供する。
【選択図】図2-1
特許請求の範囲【請求項１】
下記のいずれか一のタンパク質：
(1)配列番号2又は3のアミノ酸配列からなるタンパク質；
(2)配列番号2又は3のアミノ酸配列において、1～37個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加したアミノ酸配列であって、ただし96番目相当がグルタミン酸(E)、メチオニン(M)、グリシン(G)、イソロイシン(I)、アスパラギン(N)、又はトレオニン(T)であるアミノ酸配列からなり、かつアルギニンバソプレシン(AVP)受容体活性を有する、タンパク質；
(3)配列番号2又は3のアミノ酸配列と少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列であって、ただし96番目相当がE、M、G、I、N、又はTであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質；
(4)配列番号4のアミノ酸配列からなるタンパク質；
(5)配列番号4のアミノ酸配列において、1～37個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加したアミノ酸配列であって、ただし119番目相当がメチオニン(M)、アラニン(A)、システイン(C)、アスパラギン(N)、又はトレオニン(T)であるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質；
(6)配列番号4のアミノ酸配列と少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列であって、ただし119番目相当がM、A、C、N、又はTであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質。
続きを表示（約 1,300 文字）【請求項２】
下記のいずれか一のタンパク質である、請求項1に記載のタンパク質：
(1)配列番号2又は3のアミノ酸配列からなるタンパク質；
(2)配列番号2のアミノ酸配列において、1～37個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加したアミノ酸配列であって、ただし96番目相当がEであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質、又は配列番号3のアミノ酸配列において、1～37個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加したアミノ酸配列であって、ただし96番目相当がMであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質；；
(3)配列番号2のアミノ酸配列と少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列であって、ただし96番目相当がEであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質、又は配列番号3のアミノ酸配列と少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列であって、ただし96番目相当がMであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質；
(4)配列番号4のアミノ酸配列からなるタンパク質；
(5)配列番号4のアミノ酸配列において、1～37個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加したアミノ酸配列であって、ただし119番目相当がMであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質；
(6)配列番号4のアミノ酸配列と少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列であって、ただし119番目相当がMであるアミノ酸配列からなり、かつAVP受容体活性を有する、タンパク質。
【請求項３】
配列番号2、3、又は4のアミノ酸配列からなるタンパク質である、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項４】
請求項１～３のいずれか１項に記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項５】
請求項１～３のいずれか１項に記載のタンパク質を発現する、培養細胞。
【請求項６】
さらにｃＡＭＰバイオセンサーを発現する、請求項５に記載の培養細胞。
【請求項７】
請求項５に記載の培養細胞を含有する、ＡＶＰ測定用キット。
【請求項８】
体外診断用医薬品である、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
下記の工程を含む、試料中のＡＶＰレベルの分析方法：
(a) 試料を、ＡＶＰ受容体を発現する培養細胞に添加してインキュベートし、
このときＡＶＰ受容体は、1-デアミノ-8-D-アルギニンバソプレシン（ＤＤＡＶＰ）による活性化が抑制され、ＡＶＰ選択的に活性化されるものであり；
(b)インキュベート後のＡＶＰ受容体の活性化レベルを分析し；
(c)得られた分析結果に基づき、ＤＤＡＶＰの影響の低減されたＡＶＰレベルを分析する。
【請求項１０】
ＡＶＰ受容体が、請求項１～３のいずれか１項に記載されたタンパク質である、請求項９に記載の方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルギニンバソプレシン（ＡＶＰ；Arginine Vasopressin）受容体に関する。
続きを表示（約 1,600 文字）【背景技術】
【０００２】
バソプレシンＶ２受容体（Ｖ２Ｒ）は、主に尿細管上皮細胞に存在するＡＶＰの受容体であり、Ｇタンパク質共役受容体の一種である。脳下垂体から分泌されたＡＶＰがＶ２Ｒに結合すると、その刺激により細胞中のアデニレートシクラーゼが活性化されて環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）が産生され、ｃＡＭＰシグナルを受けて尿の再吸収が行われる。
【０００３】
中枢性尿崩症はＡＶＰの部分的又は完全な欠損を原因とする疾患であり、中枢性尿崩症患者においてはＡＶＰの分泌が正常に行われないため、腎臓における尿の再吸収に異常を示すことにより多尿・口渇といった症状を引き起こす。バソプレシンの分泌異常を原因とする疾患としては中枢性尿崩症の他に抗利尿ホルモン不適合分泌症候群（ＳＩＡＤＨ）等が知られている。また、Ｖ２受容体遺伝子への変異を主な原因とする疾患として腎性尿崩症が知られており、中枢性尿崩症と同じく尿の再吸収に異常を示すため、類似の症状を示す。
【０００４】
尿崩症患者に適切な治療を提供するためには、患者の疾患を鑑別することが重要である。たとえば中枢性尿崩症においては、患者血液試料中のＡＶＰ濃度を測定することで、中枢性尿崩症の診断ができることが知られている。このように、ＡＶＰ濃度の測定法は産業上有用であり、開発が進められている。
【０００５】
ＡＶＰ濃度の測定法は、抗原抗体反応を利用した手法が知られている。具体的な方法としては、患者血漿にアイソトープ標識したＡＶＰを加えたのちに、抗ＡＶＰ抗体と血漿を反応させることで、血漿中に含まれるアイソトープ標識ＡＶＰと血漿由来ＡＶＰの競合阻害反応により血漿中ＡＶＰ濃度を測定する方法である（非特許文献１）。
【０００６】
また、近年では細胞内ｃＡＭＰ量の測定をＡＶＰ濃度の測定に応用した例も知られている。例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を被験試料存在下でインキュベートし、試料中に含まれるＡＶＰがＶ２Ｒを刺激することにより産生されるｃＡＭＰの量を、カルシウムイオンを介した発光によって検出するバイオアッセイ系を利用したＡＶＰの測定法が知られている（特許文献１）。
【０００７】
Ｖ２Ｒに関しては、変異によって引き起こされる病態等について、多くの先行研究が存在している（例えば、非特許文献２）。しかし、いずれも疾病の機序等を解明するための研究であり、ＡＶＰ濃度の測定法に応用するための研究ないし検討は一切行われてこなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
再表２０１２／０８６７５６
特開２０１６－７５７０７号公報
特開２０１７－１９２３９６号公報
特願２０１９－２０５９５号
【非特許文献】
【０００９】
ＡＶＰキット「ヤマサ」添付文書, 2021年6月改訂（第4版）, https://www.info.pmda.go.jp/downfiles/ivd/PDF/800075_22700AMX00611000_A_04_03.pdf
NDT Plus, 2, 20-22（2008）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者らは、ＡＶＰ濃度の測定法の検討を行う中で、野生型Ｖ２ＲはＡＶＰ、ＤＤＡＶＰ(中枢性尿崩症治療薬、ＡＶＰ誘導体、1-deamino-8-D-arginine vasopressin）のいずれにおいても同程度活性化され、血中に存在するＤＤＡＶＰによってＶ２Ｒが活性化されることで、試料中ＡＶＰ濃度の正確な測定を妨げていることを発見した。患者血液試料中のＡＶＰの測定に際しては、ＤＤＡＶＰの影響を排除できることが望ましい。
（【００１１】以降は省略されています）

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