特許ウォッチ

公開番号2024105594
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-08-06
出願番号2024080040,2022129818
出願日2024-05-16,2018-08-03
発明の名称増殖性疾患及び感染症の処置のためのサイトカイン抱合体
出願人シンソークス, インコーポレイテッド
代理人個人,個人
主分類C07K 14/55 20060101AFI20240730BHJP(有機化学)
要約【課題】1つ以上の徴候の処置におけるインターロイキン(IL)抱合体(例えば、IL-2抱合体)およびその使用を提供する。さらに、インターロイキン抱合体(例えば、IL-2抱合体)の1つ以上を含む医薬組成物とキットを提供する。
【解決手段】単離および修飾されたインターロイキン2(IL-2)ポリペプチドであって、修飾されたIL-2ポリペプチドとインターロイキン2受容体α(IL-2Rα)との間の結合を減少させるが、IL-2/IL-2Rβγ複合体を形成するためにインターロイキン2βγ受容体(IL-2Rβγ)シグナル伝達複合体との有意な結合を維持する、ポリペプチド上のある位置の少なくとも1つの非天然アミノ酸を含み、ここで、IL-2Rαへの結合の減少は、野生型のIL-2ポリペプチドとIL-2Rαとの間の結合と比較される、前記単離および修飾されたインターロイキン2(IL-2)ポリペプチドである。
【選択図】図4A
特許請求の範囲【請求項１】
単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチドであって、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドとインターロイキン２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）との間の結合を減少させるが、ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒβγ複合体を形成するためにインターロイキン２βγ受容体（ＩＬ－２Ｒβγ）シグナル伝達複合体との有意な結合を維持する、ポリペプチド上のある位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含み、ここで、ＩＬ－２Ｒαへの結合の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドとＩＬ－２Ｒαとの間の結合と比較される、単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチド。
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチドであって、ここで、単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２βγシグナル伝達複合体に対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ－２αβγシグナル伝達複合体に対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、第１の受容体シグナル伝達能力と第２の受容体シグナル伝達能力との間の差は、１０倍未満である、単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチド。
【請求項３】
受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である、請求項２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項４】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、およびＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、および１０７に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項５】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、およびＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、および７２に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項６】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、およびＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、および１０７に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項７】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、およびＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、および７２に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項８】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、およびＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、および６５に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項９】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は：
リジンアナログであり；
芳香族側鎖を含み；
アジド基を含み；
アルキン基を含み；あるいは、
アルデヒド基またはケトン基を含む、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
【請求項１０】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ－２ポリペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１７年８月３日に出願された米国仮特許出願第６２／５４０，７８１号の利益を主張し、その全体は引用によって本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 31,000 文字）【０００２】
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０１８年７月２７日に作成された上記ＡＳＣＩＩのコピーは、４６０８５－７１０＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔのファイル名であり、３，７０３バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
Ｔ細胞の特徴的な集団は、免疫の恒常性と耐性を維持するために免疫系を調節する。例えば、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、病的な自己反応性を予防することによって免疫系による不適切な反応を防ぎ、その一方で、細胞傷害性Ｔ細胞は感染細胞及び／又は癌細胞を標的とする。幾つかの例では、Ｔ細胞の異なる集団の調節は、疾患又は徴候の処置に関するオプションを提供する。
【発明の概要】
【０００４】
ある実施形態では、サイトカイン抱合体及び１つ以上の兆候の処置におけるその使用が本明細書に開示される。幾つかの実施形態において、インターロイキン２（ＩＬ－２）抱合体と１つ以上の兆候の処置におけるその使用も本明細書に記載される。幾つかの例では、１つ以上の兆候は癌又は病原性感染症を含む。場合によっては、特定のＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び／又はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を刺激するか拡大するために、ＩＬ－２とＩＬ－２受容体との間の相互作用を調節する方法が本明細書に記載される。さらなる場合において、本明細書に記載される１つ以上のインターロイキン抱合体（例えば、ＩＬ－２抱合体）を含む医薬組成物及びキットも本明細書に記載される。
【０００５】
ある実施形態では、インターロイキン２（ＩＬ－２）抱合体が本明細書で開示され、上記インターロイキン２（ＩＬ－２）抱合体は：単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチド；及び、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸位置で単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに結合する抱合部分を含み、アミノ酸残基の番号はＳＥＱＩＤＮＯ：１に対応する。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置はＲ３８とＫ６４から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置はＥ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置はＥ６２である。幾つかの実施形態において、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸残基はさらに、リジン、システイン、又はヒスチジンに変異する。幾つかの実施形態において、アミノ酸残基はシステインに変異する。幾つかの実施
形態において、アミノ酸残基はリジンに変異する。幾つかの実施形態において、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸残基はさらに、非天然アミノ酸に変異する。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、Ｎ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、Ｌ－ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２抱合体は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。幾つかの実施形態において、減少した親和性は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは９９％よりも大きな減少である。幾つかの実施形態において、減少した親和性は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、５００倍、あるいは１０００倍、又はそれ以上である。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してＰＥＧを含む。幾つかの実施形態において、ＰＥＧは線形ＰＥＧあるいは分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してグリカンを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してポリアミンを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分はタンパク質を含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、タンパク質を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、Ｆｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、ＩｇＧのＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において
、追加の抱合部分はポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、ポリペプチドの各々は独立して、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドは、グルタルミル化によって修飾される。幾つかの実施形態において、抱合部分は、単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに直接結合する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーによって単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに間接的に結合する。幾つかの実施形態では、リンカーはホモ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態では、ホモ二機能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔの試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’－ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロプリオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベリン酸塩（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩（ＢＳ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジル酒石酸塩（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルグルタル酸塩（ＤＳＧ）、Ｎ、Ｎ’－ジスクシンイミジル炭酸塩（ＤＳＣ）、アジプイミド酸ジメチル（ＤＭＡ）、ジメチルピメリミデートピメリミデート（ＤＭＰ）、ジメチルスベリミデート（ＤＭＳ）、ジメチル－３，３’－ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４－ジ－（３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、１，３－ジフルオロ－４，６－ジニトロベンゼンなどのハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、４，４’－ジフルオロ－３，３’－ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス－［β－（４－アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ－トルイジン、３，３’－ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’－ｐ－ジアミノジフェニル、ジヨード－ｐ－キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’－エチレン－ビス（ヨードアセトアミド）、あるいは、Ｎ，Ｎ’－ヘキサメチレン－ビス（ヨードアセトアミド）を含む。幾つかの実施形態では、リンカーはヘテロ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ヘテロ二機能性リンカーは、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＬＣ－ｓＰＤＰ）、水溶性の長鎖Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（スルホ－ＬＣ－ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル－６－［α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸塩（スルホ－ＬＣ－ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（スルホ－ｓＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（スルホ－ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸塩（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸塩（スルホ－ｓＭＰＢ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢｓ）、スクシンイミジル６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６－［６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル－４－（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６－（（（（（４－ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボニル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＣＸ）、ｐ－ニトロフェニルヨード酢酸（ＮＰＩＡ）
、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性の架橋剤、例えば、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシル－ヒドラジド－８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（ＮＨ－ＡｓＡ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（スルホ－ＮＨ－ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル－（４－アジドサリチルアミド）ヘキサン酸塩（スルホ－ＮＨ－ＬＣ－ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル－２－（ρ－アジドサリチルアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡｓＤ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジド安息香酸塩（ＨｓＡＢ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジド安息香酸塩（スルホ－ＨｓＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－
６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル－６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（スルホ－ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ－ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル－２－（ｍ－アジド－ｏ－ニトロベンズアミド）－エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＮＤ）、Ｎ－スクシンイミジル－４（４－アジドフェニル）１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＤＰ）、Ｎ－スルホスクシンイミジル（４－アジドフェニル）－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（スルホ－ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４－（ρ－アジドフェニル）酪酸塩（スルホ－ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２－（７－アジド－４－メチルクマリン－３－アセトアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７－アジド－４－メチルクマリン－３－酢酸塩（スルホ－ｓＡＭＣＡ）、ρ－ニトロフェニルジアゾピルバート（ρＮＰＤＰ）、ρ－ニトロフェニル－２－ジアゾ－３，３，３－トリフルオロプロピオン酸塩（ＰＮＰ－ＤＴＰ）、１－（ρ－アジドサリチルアミド）－４－（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ－［４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン－４－ヨードアセトアミド、ρ－アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、あるいはρ－アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカーを随意に含む切断リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｌａ、あるいはＶａｌ－Ｌｙｓを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは非切断可能なリンカーを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート（ｓＭＣＣ）、あるいはスルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート（スルホ－ｓＭＣＣ）を随意に含む、マレイミドメチル基を含む。幾つかの実施形態において、リンカーはさらにスペーサーを含む。幾つかの実施形態において、スペーサーは、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、誘導体、又はそれらのアナログを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ－２抱合体の血清半減期を拡張することができる。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、ＩＬ－２抱合体の血清半減期を拡張することができる。
【０００６】
ある実施形態では、インターロイキン２（ＩＬ－２）抱合体が本明細書で開示され、上記インターロイキン２（ＩＬ－２）抱合体は：単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチド；及び、抱合部分を含み；ＩＬ－２抱合体は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ－２Ｒαと相互作用するアミノ酸残基に結合する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２
、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸残基に結合し、アミノ酸残基の番号はＳＥＱＩＤＮＯ：１に対応する。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してＰＥＧを含む。幾つかの実施形態において、ＰＥＧは線形ＰＥＧあるいは分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してグリカンを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してポリアミンを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分はタンパク質を含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、タンパク質を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、Ｆｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、ＩｇＧのＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分はポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、ポリペプチドの各々は独立して、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドは、グルタルミル化によって修飾される。幾つかの実施形態において、抱合部分は、単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに直接結合する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーによって単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドに間接的に結合する。幾つかの実施形態では、リンカーはホモ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態では、ホモ二機能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔの試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’－ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロプリオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベリン酸塩（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩（ＢＳ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジル酒石酸塩（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルグルタル酸塩（ＤＳＧ）、Ｎ、Ｎ’－ジスクシンイミジル炭酸塩（ＤＳＣ）、アジプイミド酸ジメチル（ＤＭＡ）、ジメチルピメリミデートピメリミデート（ＤＭＰ）、ジメチルスベリミデート（ＤＭＳ）、ジメチル－３，３’－ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４－ジ－（３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、１，３－ジフルオロ－４，６－ジニトロベンゼンなどのハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、４，４’－ジフルオロ－３，３’－ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス－［β－（４－アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ－トルイジン、３，３’－ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’－ｐ－ジアミノジフェニル、ジヨード－ｐ－キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’－エチレン－ビス（ヨードアセトアミド）、あるいは、Ｎ，Ｎ’－ヘキサメチレン－ビス（ヨードアセトアミド）を含む。幾つかの実施形態では、リンカーはヘテロ二機能性リンカーを含
む。幾つかの実施形態において、ヘテロ二機能性リンカーは、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＬＣ－ｓＰＤＰ）、水溶性の長鎖Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（スルホ－ＬＣ－ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル－６－［α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸塩（スルホ－ＬＣ－ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（スルホ－ｓＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（スルホ－ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸塩（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）酪酸塩（スルホ－ｓＭＰＢ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢｓ）、スクシンイミジル６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６－［６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル－４－（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸塩（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６－（（（（（４－ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボニル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＣＸ）、ｐ－ニトロフェニルヨード酢酸（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性の架橋剤、例えば、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシル－ヒドラジド－８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（ＮＨ－ＡｓＡ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（スルホ－ＮＨ－ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル－（４－アジドサリチルアミド）ヘキサン酸塩（スルホ－ＮＨ－ＬＣ－ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル－２－（ρ－アジドサリチルアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡｓＤ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジド安息香酸塩（ＨｓＡＢ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジド安息香酸塩（スルホ－ＨｓＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル－６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（スルホ－ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ－ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル－２－（ｍ－アジド－ｏ－ニトロベンズアミド）－エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＮＤ）、Ｎ－スクシンイミジル－４（４－アジドフェニル）１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＤＰ）、Ｎ－スルホスクシンイミジル（４－アジドフェニル）－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（スルホ－ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル
４－（ρ－アジドフェニル）酪酸塩（スルホ－ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２－（７－アジド－４－メチルクマリン－３－アセトアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７－アジド－４－メチルクマリン－３－酢酸塩（スルホ－ｓＡＭＣＡ）、ρ－ニトロフェニルジアゾピルバート（ρＮＰＤＰ）、ρ－ニトロフェニル－２－ジアゾ－３，３，３－トリフルオロプロピオン酸塩（ＰＮＰ－ＤＴＰ）、１－（ρ－アジドサリチルアミド）－４－（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ－［４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン－４－ヨードアセトアミド、ρ－アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、あるいはρ－アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含
む。幾つかの実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカーを随意に含む切断リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｌａ、あるいはＶａｌ－Ｌｙｓを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは非切断可能なリンカーを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート（ｓＭＣＣ）、あるいはスルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート（スルホ－ｓＭＣＣ）を随意に含む、マレイミドメチル基を含む。幾つかの実施形態において、リンカーはさらにスペーサーを含む。幾つかの実施形態において、スペーサーは、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、誘導体、又はそれらのアナログを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ－２抱合体の血清半減期を延長させることができる。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、ＩＬ－２抱合体の血清半減期を延長させることができる。
【０００７】
幾つかの実施形態では、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチドが本明細書に開示され、これは、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドとインターロイキン２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）との間の結合を減少させるが、ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒβγ複合体を形成するためにインターロイキン２βγ受容体（ＩＬ－２Ｒβγ）シグナル伝達複合体との結合を著しく損なわない、ポリペプチド上のある位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含み、ここで、ＩＬ－２Ｒαへの結合の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドとＩＬ－２Ｒαとの間の結合と比較される。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、
Ｌ－ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ－２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは９９％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは：完全長のＩＬ－２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ－
２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ－２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ－２領域１０－１３３、２０－１３３、３０－１３３、１０－１３０、２０－１３０、３０－１３０、１０－１２５、２０－１２５、３０－１２５、１－１３０、あるいは１－１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ－２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドによる、ＩＬ－２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドによる上記細胞集団の活性化と著しく異なるわけではなく、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの効能は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドの効能より少なくとも１倍高い。幾つかの実施形態において、上記アクチベーターが上記細胞集団に接している場合、修飾ＩＬ－２ポリペプチドは、２０％、１５％、１０％、５％、１％、あるいは０．１％未満、ＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を拡張する。幾つかの実施形態において、修飾ＩＬ－２ポリペプチドは、上記細胞集団中のＴｒｅｇ細胞を拡張しない。
【０００８】
幾つかの実施形態では、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチドが本明細書に開示され、これは、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドとインターロイキン２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）との間の結合を減少させるが、ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒβγ複合体を形成するためにインターロイキン２βγ受容体（ＩＬ－２Ｒβγ）シグナル伝達複合体との有意な結合を維持する、ポリペプチド上のある位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含み、ここで、ＩＬ－２Ｒαへの結合の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドとＩＬ－２Ｒαとの間の結合と比較される。幾つかの実施形態において、受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載され
る位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；アルキン基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、Ｌ－ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの
実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ－２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは：完全長のＩＬ－２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ－２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ－２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ－２領域１０－１３３、２０－１３３、３０－１３３、１０－１３０、２０－１３０、３０－１３０、１０－１２５、２０－１２５、３０－１２５、１－１３０、あるいは１－１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ－２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドによる、ＩＬ－２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ－２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３
０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγに対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγに対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い。
【０００９】
ある実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチドが本明細書で開示され、単離及び修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２βγシグナル伝達複合体に対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ－２αβγシグナル伝達複合体に対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、第１の受容体シグナル伝達能力と第２の受容体シグナル伝達能力との間の差は、１０倍未満である。幾つかの実施形態において、受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；アルキン基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、Ｌ－ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリ
ン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ－２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは：完全長のＩＬ－２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ－２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ－２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、
Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ－２領域１０－１３３、２０－１３３、３０－１３３、１０－１３０、２０－１３０、３０－１３０、１０－１２５、２０－１２５、３０－１２５、１－１３０、あるいは１－１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ－２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドによる、ＩＬ－２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ－２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγに対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγに対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い。
【００１０】
ある実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ－２）ポリペプチドが本明細書で開示され、単離及び修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２βγシグナル伝達複合体の活性化に対する第１のＥＣ５０値と、ＩＬ－２αβγシグナル伝達複合体の活性化に対する第２のＥＣ５０値を提供し、第１のＥＣ５０値と第２のＥＣ５０値との間の差は、１０倍未満である。幾つかの実施形態において、シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６
２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；アルキン基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、Ｌ－ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態におい
て、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ－２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは：完全長のＩＬ－２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ－２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ－２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ－２領域１０－１３３、２０－１３３、３０－１３３、１０－１３０、２０－１３０、３０－１３０、１０－１２５、２０－１２５、３０－１２５、１－１３０、あるいは１－１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ－２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドによる、ＩＬ－２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。幾つかの実施形態において、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ
－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ－２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγに対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ－２Ｒβγに対する野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ－２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ－２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許