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公開番号2024019733
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-02-09
出願番号2024000208,2022022163
出願日2024-01-04,2017-08-25
発明の名称ASGR1発現を阻害するためのRNAiコンストラクトおよびその使用方法
出願人アムジェンインコーポレイテッド
代理人個人,個人
主分類C12N 15/113 20100101AFI20240202BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】心血管疾患の治療のためのさらなる治療薬を提供する。
【解決手段】本発明は、アシアロ糖タンパク質受容体1(ASGR1)の肝臓での発現を調節するための組成物および方法を提供する。詳細には、本発明は、RNA干渉を介してASGR1発現を低減するための核酸をベースにした治療薬、および心血管疾患を治療または予防するためにそのような核酸をベースにした治療薬を使用する方法を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
図面に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１６年８月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／３８０，２１６号明細書の利益を主張するものであり、その出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 4,500 文字）【０００２】
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を包含し、その配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１７年７月２５日に作成された、コンピュータ可読フォーマットの配列表のコピーは、名称がＡ－２０９４－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＴ２５であり、サイズが１．４９メガバイトである。
【０００３】
本発明は、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）の肝臓での発現を調節するための組成物および方法に関する。詳細には、本発明は、ＲＮＡ干渉を介してＡＳＧＲ１発現を低減するための核酸をベースにした治療薬、および心血管疾患を治療または予防するためにそのような核酸をベースにした治療薬を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
最近の数年にわたって出現した多くの進歩および新たな治療薬にもかかわらず、心血管疾患は、世界中で主要な死因のままである。米国では、成人の３人に１人は、冠動脈疾患、心筋梗塞、狭心症、心不全および卒中を含む何らかの心血管疾患を有している（Ｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅａｎｄｓｔｒｏｋｅｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ－２０１６ｕｐｄａｔｅ：ａｒｅｐｏｒｔｆｒｏｍｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＨｅａｒｔＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１３３：ｅ３８－ｅ３６０，２０１６）。２０１３年には、全世界で１７３０万人および米国で１４０万人が何らかの心血管疾患で死亡し、その年の全世界の死者の３１％および米国における全死者の５４％を占めた（Ｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅａｎｄｓｔｒｏｋｅｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ－２０１６ｕｐｄａｔｅ）。現在、心血管疾患は、毎年、次に主要な２つの死因である癌および慢性下気道疾患を合わせたものよりも多くの生命を奪っている（Ｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅａｎｄｓｔｒｏｋｅｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ－２０１６ｕｐｄａｔｅ）。したがって、心血管疾患の治療のためのさらなる治療薬の必要性が残っている。
アシアロ糖タンパク質受容体は、末端ガラクトースおよびＮ－アセチルガラクトサミン残基を有するリガンドに結合することにより、血清からの脱シアル化糖タンパク質の除去および分解に寄与する、肝細胞の表面に発現されるカルシウム依存性受容体である（Ｗｅｉｇｅｌ，Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ，Ｖｏｌ．１６：５１９－５２４，１９９４；Ｓｔｏｃｋｅｒｔ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，Ｖｏｌ．７５：５９１－６０９，１９９５）。ヘテロオリゴマーのアシアロ糖タンパク質受容体は、４８ｋＤａのアシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）主サブユニットおよび４０ｋＤａのアシアロ糖タンパク質受容体２（ＡＳＧＲ２）副サブユニットの２つの異なるタンパク質で構成されている（例えば、Ｓｔｏｃｋｅｒｔ，１９９５を参照されたい）。アシアロ糖タンパク質受容体は、低密度リポタンパク質およびカイロミクロンレムナントのクリアランスに関与していることが示されており、これは、リポタンパク質代謝における受容体に関する役割を示唆している（Ｗｉｎｄｌｅｒｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＪ．，Ｖｏｌ．２７６（Ｐｔ１）：７９－８７，１９９１；Ｉｓｈｉｂａｓｈｉｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７１：２２４２２－２２４２７，１９９６）。近年、アシアロ糖タンパク質受容体のＡＳＧＲ１サブユニットの機能欠損型バリアントアレルのヒト保因者は、非保因者と比べて非高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールの血清レベルが低く、かつ冠動脈疾患および心筋梗塞のリスクが低いと報告された（Ｎｉｏｉｅｔａｌ．，ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３７４（２２）：２１３１－２１４１，２０１６）。したがって、ＡＳＧＲ１機能を標的とした治療薬は、非ＨＤＬコレステロールのレベルを低減し、かつ心血管疾患、特に冠動脈疾患を治療する新たな方策となる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
Ｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅａｎｄｓｔｒｏｋｅｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ－２０１６ｕｐｄａｔｅ：ａｒｅｐｏｒｔｆｒｏｍｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＨｅａｒｔＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１３３：ｅ３８－ｅ３６０，２０１６
Ｗｅｉｇｅｌ，Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ，Ｖｏｌ．１６：５１９－５２４，１９９４
Ｓｔｏｃｋｅｒｔ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，Ｖｏｌ．７５：５９１－６０９，１９９５
Ｗｉｎｄｌｅｒｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＪ．，Ｖｏｌ．２７６（Ｐｔ１）：７９－８７，１９９１
Ｉｓｈｉｂａｓｈｉｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７１：２２４２２－２２４２７，１９９６
Ｎｉｏｉｅｔａｌ．，ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３７４（２２）：２１３１－２１４１，２０１６
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＡＳＧＲ１遺伝子を標的化し、かつ肝臓細胞におけるＡＳＧＲ１発現を低減するＲＮＡｉコンストラクトの設計および生成に部分的に基づく。ＡＳＧＲ１発現の配列特異的阻害は、心血管疾患などのＡＳＧＲ１発現と関連する病態を治療または予防するのに有用である。したがって、一実施形態では、本発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉコンストラクトであって、アンチセンス鎖は、ＡＳＧＲ１のｍＲＮＡ配列と相補的な配列を有する領域を含む、ＲＮＡｉコンストラクトを提供する。ある種の実施形態では、アンチセンス鎖は、表１、表６または表８に列記されるアンチセンス配列からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを有する領域を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉコンストラクトのセンス鎖は、約１５～約３０塩基対長の二重鎖領域を形成するアンチセンス鎖の配列と十分に相補的な配列を含む。これらおよび他の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の各々は、約１５～３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも１つの平滑末端を含む。他の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも１つのヌクレオチドオーバーハングを含む。このようなヌクレオチドオーバーハングは、１～６個の不対ヌクレオチドを含み得、かつセンス鎖の３’末端、アンチセンス鎖の３’末端またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方の３’末端に位置し得る。ある種の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、センス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の３’末端に２個の不対ヌクレオチドのオーバーハングを含む。他の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、アンチセンス鎖の３’末端に２個の不対ヌクレオチドのオーバーハングを含み、かつセンス鎖の３’末端／アンチセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。
【０００８】
本発明のＲＮＡｉコンストラクトは、リボース環、核酸塩基またはホスホジエステル骨格への修飾を有するヌクレオチドを含む１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、１つ以上の２’－修飾ヌクレオチドを含む。このような２’－修飾ヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾ヌクレオチド、二環性核酸（ＢＮＡ）またはこれらの組み合わせを含むことができる。特定の一実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、１つ以上の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトのセンス鎖およびアンチセンス鎖中の全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、ヌクレオチド間またはヌクレオシド間の修飾された結合などの少なくとも１つの骨格修飾を含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の３’または５’末端に配置され得る。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本発明のＲＮＡｉコンストラクトのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖は、表１、６または８に列記されるアンチセンス配列およびセンス配列からの配列を含むかまたはそれからなり得る。ある種の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、表１～１０のいずれか１つに列記される二重鎖化合物のいずれか１つであり得る。一実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－１０９８、Ｄ－１１７６、Ｄ－１２００、Ｄ－１２０６、Ｄ－１２３５、Ｄ－１２４６、Ｄ－１３７３、Ｄ－１３８９、Ｄ－１８１３、Ｄ－１８１５、Ｄ－１９８３、Ｄ－２０００、Ｄ－２０４５、Ｄ－２１４２、Ｄ－２１４３、Ｄ－１４３８、Ｄ－１４９４、Ｄ－２３５７、Ｄ－２３５９、Ｄ－２３６１、Ｄ－２３６５、Ｄ－２４６１、Ｄ－３０３６、Ｄ－３０３７、Ｄ－３０５１、Ｄ－３０５３、Ｄ－３０５７、Ｄ－３７７９、Ｄ－３７８０、Ｄ－３７８２、Ｄ－３７８８、Ｄ－３７９１、Ｄ－３７９５、Ｄ－３７９９またはＤ－３８００である。別の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－１２００、Ｄ－１２０６、Ｄ－１２３５、Ｄ－１８１５、Ｄ－２１４３、Ｄ－２３５９、Ｄ－２３６１、Ｄ－２３６５、Ｄ－２１４２、Ｄ－１１７６、Ｄ－３７７９、Ｄ－３７８２、Ｄ－３７８８、Ｄ－３７９９またはＤ－３８００である。別の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－２３５９である。別の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－１８１５である。さらに別の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－１２３５である。さらに別の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－２１４３である。別の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－２３６１である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－３７８２である。他の実施形態では、ＲＮＡｉコンストラクトは、Ｄ－３７９９である。
（【００１１】以降は省略されています）

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