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公開番号2023166616
公報種別公開特許公報(A)
公開日2023-11-21
出願番号2023158324,2019562274
出願日2023-09-22,2018-05-11
発明の名称細胞の操作のための材料及び方法並びに免疫腫瘍学におけるその使用
出願人クリスパーセラピューティクスアクチェンゲゼルシャフト
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 5/10 20060101AFI20231114BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】遺伝的障害に対処しようとする世界中の研究者及び医療専門家の努力にも関わらず、及び前出のゲノム操作手法の有望さにも関わらず、再生医学及び/又は免疫腫瘍学関連の適応疾患が関わる細胞療法治療を支援する安全且つ有効な万能ドナー細胞の開発が長年にわたり切実に必要とされ続けている。
【解決手段】細胞表面にキメラ抗原受容体(CAR)コンストラクトを発現するように操作されたゲノム編集細胞を作製するための材料及び方法、並びに細胞における1つ以上の免疫腫瘍学関連遺伝子の発現、機能、又は活性を調節するゲノム編集のための材料及び方法、並びに操作されたゲノム編集細胞を使用して患者を治療するための材料及び方法。
【選択図】図13A
特許請求の範囲【請求項１】
（ｉ）抗ＣＤ１９抗体断片を含むエクトドメイン、（ｉｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＣＤ２８又は４１ＢＢ共刺激ドメインと任意選択でＣＤ３ｚ共刺激ドメインとを含むエンドドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸の挿入によって破壊されたＴ細胞受容体α鎖定常領域（ＴＲＡＣ）遺伝子；及び
破壊されたβ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子
を含む操作されたＴ細胞
を含む細胞集団であって、前記操作されたＴ細胞の少なくとも７０％が検出可能なレベルのＴＣＲ表面タンパク質を発現せず、且つ検出可能なレベルのＢ２Ｍ表面タンパク質を発現しない、及び／又は前記操作されたＴ細胞の少なくとも５０％が検出可能なレベルの前記ＣＡＲを発現する、細胞集団。
続きを表示（約 920 文字）【請求項２】
前記操作されたＴ細胞が未精製及び／又は未集積である、請求項１に記載の細胞集団。
【請求項３】
前記細胞集団が未精製及び／又は未集積である、請求項１又は２に記載の細胞集団。
【請求項４】
前記抗ＣＤ１９抗体断片が抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ抗体断片である、請求項１～３のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項５】
前記抗ＣＤ１９抗体断片がヒト化抗ＣＤ１９抗体断片である、請求項１～４のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項６】
前記抗ＣＤ１９抗体断片が配列番号１３３３のヌクレオチド配列によってコードされる、及び／又は前記抗ＣＤ１９抗体断片が配列番号１３３４のアミノ酸配列を含む；
前記抗ＣＤ１９抗体断片が、配列番号１５９５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む；及び／又は
前記抗ＣＤ１９抗体断片が、配列番号１５９６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、
請求項１～５のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項７】
前記ＣＡＲの前記エクトドメインが、シグナルペプチド、任意選択でＣＤ８シグナルペプチドを更に含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項８】
前記ＣＡＲが、前記抗ＣＤ１９抗体断片と前記ＣＤ８膜貫通ドメインとの間に位置するヒンジドメイン、任意選択でＣＤ８ヒンジドメインを更に含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項９】
前記ＣＡＲが、Ｎ末端からＣ末端に、以下の構造配置：抗ＣＤ１９抗体断片を含む前記エクトドメイン、ＣＤ８ヒンジドメイン、前記ＣＤ８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８又は４１ＢＢ共刺激ドメインとＣＤ３ｚ共刺激ドメインとを含む前記エンドドメインを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項１０】
前記ＣＡＲが配列番号１３１６のヌクレオチド配列によってコードされる、及び／又は前記ＣＡＲが配列番号１３３８のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の細胞集団。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１７年５月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／５０５，６４９号明細書、２０１７年５月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／５０８，８６２号明細書、２０１７年７月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／５３８，１３８号明細書、２０１７年１０月２日に出願された米国仮特許出願第６２／５６７，０１２号明細書、２０１７年１０月２日に出願された米国仮特許出願第６２／５６７，００８号明細書、２０１７年１１月９日に出願された米国仮特許出願第６２／５８３，７９３号明細書、２０１８年３月６日に出願された米国仮特許出願第６２／６３９，３３２号明細書、２０１８年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／６４８，１３８号明細書、及び２０１８年４月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／６５５，５１０号明細書の利益を主張するものであり、これらの各々は参照により全体として本明細書に援用される。
続きを表示（約 2,500 文字）【０００２】
一部の態様において、本願は、細胞表面にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトを発現するように操作されたゲノム編集細胞を作製するための材料及び方法を提供する。他の態様において、本願は、細胞における１つ以上の免疫腫瘍学関連遺伝子の発現、機能、又は活性を調節するゲノム編集のための材料及び方法を提供する。更に他の態様において、本願は、エキソビボ及びインビボの両方で、ゲノム編集された操作された細胞を使用して患者を治療するための材料及び方法を提供する。
【０００３】
配列表の参照による援用
本願はコンピュータ可読形式の配列表（ファイル名：Ｃ１５４２７００００ＷＯ００－ＳＥＱ－ＨＪＤ；１．１９ＭＢ－ＡＳＣＩＩテキストファイル；作成日２０１８年５月１１日）を含み、これは全体として参照により本明細書に援用され、本開示の一部をなす。
【背景技術】
【０００４】
ゲノム操作とは、生体の遺伝情報（ゲノム）を標的化して特異的に修飾するための戦略及び技法を指す。ゲノム操作は、特に人間の健康に関する領域において、例えば有害な突然変異を持つ遺伝子の修正又は遺伝子機能の探索に幅広い適用可能性があるため、活発な研究分野である。トランス遺伝子を生細胞に挿入するために開発された初期の技術は、多くの場合にゲノムへの新規配列の挿入位置がランダムである性質により制限された。ゲノムへのランダムな挿入は、隣接遺伝子の正常な調節を破壊することになり、意図せぬ重大な効果につながり得る。更に、２つの異なる細胞において配列が同じ箇所に挿入されるであろう保証がないことに伴い、ランダムな組込み技術は再現性をほとんど提供しない。ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＨＥ、及びＭｅｇａＴＡＬなどの一般的なゲノム操作戦略はＤＮＡの特異的な範囲の修飾を可能にし、従って初期の技術と比較すると修正又は挿入の精度は上がっている。これらのプラットフォームは高度な再現性を提供するが、依然として制限はある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
遺伝的障害に対処しようとする世界中の研究者及び医療専門家の努力にも関わらず、及び前出のゲノム操作手法の有望さにも関わらず、再生医学及び／又は免疫腫瘍学関連の適応疾患が関わる細胞療法治療を支援する安全且つ有効な万能ドナー細胞の開発が長年にわたり切実に必要とされ続けている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書には、一部の実施形態において、ある種の悪性腫瘍の治療に使用される細胞、方法、及び組成物（例えば、核酸、ベクター、医薬組成物）が提供される。本開示の遺伝子編集技術は、一部の態様において、ＣＤ１９、ＣＤ７０、又はＢＣＭＡ抗原を発現する腫瘍細胞を標的とする免疫細胞療法の操作に使用される。意外にも、本開示の方法により操作された免疫細胞療法は、インビボで腫瘍容積を未治療の対照と比べて一部の実施形態では少なくとも８０％低下させる能力を有する。本明細書に提供されるとおりの動物モデルからのデータは、操作された免疫細胞療法が、一部の実施形態において、検出可能な腫瘍細胞の存在をインビボ投与の僅か３０日後に消失させ、これらの動物モデルにおける効果は細胞療法の単回投与後に少なくとも６６日間持続することを実証する。更に、一部の実施形態において、本開示の操作された免疫細胞療法は、対象の生存率を未治療の対照と比べて少なくとも５０％上昇させる能力を有する。
【０００７】
更にまた、これらの細胞は宿主対移植片病及び移植片対宿主病の両方を遮断するように操作され、これにより細胞は、同種異系細胞移植治療法としての使用に好適となる。
【０００８】
更に、本明細書に提供される遺伝子コンストラクト及び方法は、一部の実施形態において、インビボでの投与前に細胞集団の精製又は集積が必要でない十分に高い遺伝子修飾効率での免疫細胞集団の操作に使用し得る。例えば、本開示の例示的な操作された細胞集団の免疫細胞の少なくとも８０％がＴ細胞受容体α定常遺伝子及びβ２ミクログロブリン遺伝子の両方の表面発現を欠いており、免疫細胞の少なくとも５０％はまた目的の（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ７０、又はＢＣＭＡを標的とする）特定のキメラ抗原受容体を発現する。
【０００９】
従って、本明細書には、一部の態様において、（ｉ）抗ＣＤ１９抗体断片を含むエクトドメイン、（ｉｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＣＤ２８又は４１ＢＢ共刺激ドメインと任意選択でＣＤ３ｚ共刺激ドメインとを含むエンドドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸の挿入によって破壊されたＴ細胞受容体α鎖定常領域（ＴＲＡＣ）遺伝子と、破壊されたβ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子とを含む操作されたＴ細胞を含む細胞集団が提供され、ここで操作されたＴ細胞の少なくとも７０％は検出可能なレベルのＴＣＲ表面タンパク質を発現せず、且つ検出可能なレベルのＢ２Ｍ表面タンパク質を発現しない、及び／又は操作されたＴ細胞の少なくとも５０％は検出可能なレベルのＣＡＲを発現する。
【００１０】
他の態様は、（ｉ）抗ＣＤ７０抗体断片を含むエクトドメイン、（ｉｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＣＤ２８又は４１ＢＢ共刺激ドメインと任意選択でＣＤ３ｚ共刺激ドメインとを含むエンドドメインを含むＣＡＲをコードする核酸の挿入によって破壊されたＴＲＡＣ遺伝子と、破壊されたＢ２Ｍ遺伝子とを含む操作されたＴ細胞を含む細胞集団を提供し、ここで操作されたＴ細胞の少なくとも７０％は検出可能なレベルのＴＣＲ表面タンパク質を発現せず、且つ検出可能なレベルのＢ２Ｍ表面タンパク質を発現しない、及び／又は操作されたＴ細胞の少なくとも５０％は検出可能なレベルのＣＡＲを発現する。
（【００１１】以降は省略されています）

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