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公開番号2023128970
公報種別公開特許公報(A)
公開日2023-09-14
出願番号2022033681
出願日2022-03-04
発明の名称トランスジェニックマウス
出願人国立大学法人佐賀大学
代理人個人
主分類A01K 67/027 20060101AFI20230907BHJP(農業;林業;畜産;狩猟;捕獲;漁業)
要約【課題】ヒトコクサッキーB群ウイルス受容体遺伝子を膵β細胞特異的に発現するトランスジェニックマウスを提供する。
【解決手段】トランスジェニックマウスは、膵β細胞にヒトコクサッキーB群ウイルス受容体をコードするDNAを有し、膵β細胞に特異的にヒトコクサッキーB群ウイルス受容体を発現する。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
膵β細胞にヒトコクサッキーB群ウイルス受容体をコードするDNAを有し、膵β細胞に特異的にヒトコクサッキーB群ウイルス受容体を発現していることを特徴とする、
トランスジェニックマウス。
続きを表示（約 1,000 文字）【請求項２】
請求項１に記載のトランスジェニックマウスにおいて、
前記DNAが、マウスインスリンプロモーターの制御下に配置される、
トランスジェニックマウス。
【請求項３】
請求項１または２に記載のトランスジェニックマウスにおいて、
前記ヒトコクサッキーB群ウイルス受容体が、ヒトコクサッキーアデノウイルス受容体(hCXADR)、またはヒト崩壊促進因子（DAF）である、
トランスジェニックマウス。
【請求項４】
請求項３に記載のトランスジェニックマウスにおいて、
前記DNAが、配列番号1に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド、または、
配列番号1に示す塩基配列からなるポリヌクレオチドに対して９０%以上の塩基配列同一性を有するポリヌクレオチドであって、かつ、膵β細胞に特異的にヒトコクサッキーB群ウイルス受容体を発現するタンパク質をコードするポリヌクレオチドから構成される、
トランスジェニックマウス。
【請求項５】
請求項１～４のいずれかに記載のトランスジェニックマウスにおいて、
ヒトコクサッキーB群ウイルスの感染により糖尿病の病態を示す、
トランスジェニックマウス。
【請求項６】
請求項５に記載のトランスジェニックマウスにおいて、
前記糖尿病が、1型糖尿病、または2型糖尿病である、
トランスジェニックマウス。
【請求項７】
請求項１～６のいずれかに記載のトランスジェニックマウスを用いた、
糖尿病予防ワクチンの製造方法。
【請求項８】
請求項７に記載の糖尿病予防ワクチンの製造方法において、
前記トランスジェニックマウスに候補ウィルスを接種する接種工程と、
前記候補ウィルスを接種されたトランスジェニックマウスの血糖値及び／又はインスリン値の変動に基づいて糖尿病の発症状況を判定する判定工程と、
糖尿病発症と判定された候補ウィルスの接種状況を同定する同定工程と、
前記発症状況および接種状況に基づいて、糖尿病予防ワクチンを製造する製造工程と、
を含む、
糖尿病予防ワクチンの製造方法。
【請求項９】
請求項１～６のいずれかに記載のトランスジェニックマウスを用いた、
糖尿病治療薬のスクリーニング方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランスジェニックマウスに関し、特にウイルス受容体がコードされたトランスジェニックマウスに関する。
続きを表示（約 2,200 文字）【背景技術】
【０００２】
糖尿病に関して、平成28年厚生労働省の推計では、日本人の糖尿病患者数が1000万人、予備軍も含めると2000万人にも達すると公表されている。さらに、国際糖尿病連合(IDF)は、2019年世界の糖尿病患者は4億6300万人、2045年には7億人に登ると警鐘を鳴らしている。
【０００３】
このように、国内外で糖尿病患者の広がりとその増加は、社会的問題であるばかりでなく、個々人の健康、経済、そして生活の質に関わる重要な課題である。糖尿病は、社会の経済的な進展に伴う生活習慣病として、過食、肥満、運動不足、加齢の影響が大きいと理解されているが、ウイルス感染の重要性も認識されつつある。
【０００４】
これまでにウイルスによる糖尿病について、多くの基礎的、臨床的研究が蓄積され、様々なウイルスが糖尿病発症に関与することが知られている。その候補ウイルスとして、コクサッキーB群（CoxB)ウイルス、A型肝炎ウイルス、風疹ウイルス、ムンプスウイルス、及びロタウイルス等が挙げられている。さらに、近年、世界を震撼させている新型コロナウイルスも糖尿病発症に関わるとの興味深い報告も相次いでいる。
【０００５】
現在、糖尿病原因候補ウイルスの中でもエンテロウイルスに属するコクサッキーB群（CoxB)ウイルスが急性発症糖尿病患者膵島に認められるとの報告が積み重なっている（例えば、非特許文献1,2参照）。
【０００６】
また、分離したウイルスが実験的に免疫を脆弱化したマウスに糖尿病を発症させるとの報告が存在している（例えば、非特許文献3,4,5参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
Jimbo E, Kobayashi T, Takeshita A, Mine K, Nagafuchi S, Fukui T, Yagihashi S. Immunohistochemical detection of enteroviruses in pancreatic tissues of patients with type 1 diabetes using a polyclonal antibody against 2A protease of Coxsackievirus. J Diabetes Investigation published online.
Nagafuchi S (Guest Editor).Editorial:Regulation of viral infection in diabetes. Biology 10:529, 2021.
Nagafuchi S, Mine K, Takahashi H, Anzai K, Yoshikai Y. Viruses with masked pathogenicity and genetically susceptible hosts. J Med Virol 91:1365-1367,2019 with August Issue Front Cover.
Flodstroem M, Maday A, Balakrishna D, Cleary MM, Yoshimura A, Sarvetnick N. Target cell defense prevents the development of diabetes after viral infection. Nat Immunol. 3:373-382, 2002.
McCartney SA, Vermi W, Lonardi S, Rossini C, Otero K, Calderon B, Gilfillan S, Diamond MS, Unanue ER, Colonna M. RNA sensor-induced type I IFN prevents diabetes caused by a β cell tropic virus in mice. J Clin Invest. 121:1497-1507, 2011.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、非特許文献4および5に示されるように、分離したウイルスが実験的に免疫を脆弱化したマウスに糖尿病を発症させるとの報告は存在するものの、決定的な証拠は乏しいのが実情である。
【０００９】
その理由としては、病原体の証明法であるコッホの三原則（1.ある一定の病気には一定の微生物が見出されること、2.その微生物を分離できること、3.分離した微生物を感受性のある動物に感染させて同じ病気を起こせること）を満たすような、ウイルスによる糖尿病誘発性の適切な検定システム（ヒトのウイルス糖尿病発症メカニズムを正確に模倣した動物モデル）が未だ存在していないことが挙げられる。
【００１０】
すなわち、コッホの原則では、ある微生物がある疾病の原因であることの証明にヒトの感受性を模倣した動物モデル（例えばマウス）を用いて当該疾病が発症することを根拠とするものの、糖尿病に関しては当該動物モデルが存在しないことからコッホの原則が確認できないという状況である。
（【００１１】以降は省略されています）

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