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公開番号2023071728
公報種別公開特許公報(A)
公開日2023-05-23
出願番号2023020284,2019546831
出願日2023-02-13,2018-02-26
発明の名称多能性幹細胞および造血始原細胞からのヒトミクログリア様細胞の分化と使用
出願人ザリージェンツオブザユニバーシティオブカリフォルニア,The Regents of the University of California
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C12N 5/079 20100101AFI20230516BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】ヒトミクログリア様細胞を含むインビトロ細胞集団、およびヒトミクログリア様細胞を作製するインビトロ方法を提供する。
【解決手段】ヒトミクログリア様細胞(iMGL)を含むインビトロ細胞集団であって、ここで該集団の細胞の少なくとも70%がP2RY12およびTREM2を発現するiMGLである、細胞集団を提供する。また、ヒトミクログリア様細胞(iMGL)を作製するインビトロ方法であって、ヒト誘導造血始原細胞(iHPC)をCSF-1、IL-34、およびTGFβ1またはTGFβ模倣物を含むミクログリア分化培地と接触させて、iHPCをiMGLに分化させることを含む、方法である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
多能性幹細胞（ＰＳＣ）からヒトミクログリア様細胞（ｉＭＧＬ）を産生する方法であって、
（ｉ）造血分化因子を補充した培地を使用してＰＳＣを分化させて誘導造血始原細胞（ｉＨＰＣ）を産生する工程と、
（ｉｉ）ミクログリア分化培地を使用してＣＤ４３
＋
ｉＨＰＣをヒトミクログリア様細胞（ｉＭＧＬ）に分化させる工程と
を含む方法。
続きを表示（約 960 文字）【請求項２】
工程（ｉ）が、３日～２１日の間のインキュベーション期間を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程（ｉ）のインキュベーション期間が１０日である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記インキュベーション期間の１～１０日目に、前記ＰＳＣが低酸素または正常酸素環境においてインキュベートされる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記インキュベーション期間の１日目および２日目に、前記培地がＦＧＦ２、ＢＭＰ４、アクチビンＡ、ＬｉＣｌ、およびＶＥＧＦの造血分化因子を含み；
前記インキュベーション期間の３日目および４日目に、前記培地がＦＧＦ２およびＶＥＧＦの造血分化因子を含み；
前記インキュベーション期間の５～１０日目に、前記培地がＦＧＦ２、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、ＳＣＦ、ＩＬ３、およびＩＬ６の造血分化因子を含む、
請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記培地中のＦＧＦ２、ＢＭＰ４、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、ＳＣＦ、ＩＬ－３、およびＩＬ－６の各々の濃度が、５ｎｇ／ｍｌ～１００ｎｇ／ｍｌの間であり、
前記培地中のアクチビンＡの濃度が、０．１ｎｇ／ｍｌ～３０ｎｇ／ｍｌの間である、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記培地中のＦＧＦ２、ＢＭＰ４、ＶＥＧＦ、ＴＰＯ、ＳＣＦ、ＩＬ－３、およびＩＬ－６の各々の濃度が、約５０ｎｇ／ｍｌであり、
前記培地中のアクチビンＡの濃度が、約１２．５ｎｇ／ｍｌであり、
ＬｉＣｌの濃度が約２ｍＭである、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用してＣＤ４３
＋
ｉＨＰＣを単離することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＣＤ４３
＋
ｉＨＰＣを単離することが、ＣＤ４３
＋
マーカーを選択することによって実行される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
単離された前記ｉＨＰＣが、８０％を超える純度である、請求項９に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年２月２８日に出願された米国仮出願第６２／４６４，９２５号の優先権を主張する。上述の出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
続きを表示（約 1,200 文字）【０００２】
連邦政府による資金提供を受けたＲ＆Ｄの記載
本発明は、米国立衛生研究所によって与えられたＡＧ０４８０９９の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
本明細書には、（ｉ）ヒトミクログリア様細胞（ｉＭＧＬ）および（ｉｉ）ｉＭＧＬを作製する方法の実施形態が記載されている。
【背景技術】
【０００４】
ミクログリア細胞は、ＣＮＳの先天性免疫細胞であり、ＣＮＳの生理学的発達に役割を果たすことが知られている。さらに、ミクログリア細胞はアルツハイマー病などの神経障害において役割を果たすことが知られている。ＣＮＳの発達および神経障害においてミクログリア細胞が果たす役割をさらに調査するためにミクログリア細胞を取得する技術には、欠陥がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（ＰＳＣ）からヒトミクログリア様（ｉＭＧＬ）を産生する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、（ｉ）造血分化因子を補充した培地を使用してＰＳＣを分化させて誘導造血始原細胞（ｉＨＰＣ）を産生する工程と、（ｉｉ）ＣＤ４３
＋
ｉＨＰＣを単離する工程と、（ｉｉｉ）ミクログリア分化培地を使用してＣＤ４３
＋
ｉＨＰＣをｉＭＧＬに分化させる工程と、（ｉｖ）ｉＭＧＬを成熟させる工程とを含む。
【０００６】
いくつかの実施形態では、方法は、（ｉ）造血分化因子を補充した培地を使用してＰＳＣを分化させる工程と、（ｉｉ）ミクログリア分化培地を使用してＣＤ４３
＋
ｉＨＰＣをｉＭＧＬに分化させる工程とを含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、第１の型の細胞からヒトミクログリア様（ｉＭＧＬ）細胞を産生する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、（ｉ）第１の型の細胞を誘導造血始原細胞（ｉＨＰＣ）に分化させる工程と、（ｉｉ）ｉＨＰＣを分化させてｉＭＧＬを産生する工程とを含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ＰＳＣは胚様体に由来しない。いくつかの実施形態では、ＰＳＣは単一細胞ＰＳＣを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＰＳＣは誘導ＰＳＣ（ｉＰＳＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＳＣは胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＳＣは哺乳動物のＰＳＣを含む。いくつかの実施形態では、ＰＳＣはヒト起源のものである。いくつかの実施形態では、ＰＳＣはマウスＰＳＣである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＰＳＣからｉＭＧＬを産生する方法であって、（ｉ）ＰＳＣをｉＨＰＣに分化させる工程と、（ｉｉ）ｉＨＰＣをｉＭＧＬに分化させる工程とを含む方法が提供される。
（【００１１】以降は省略されています）

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