特許ウォッチ

公開番号2023068338
公報種別公開特許公報(A)
公開日2023-05-17
出願番号2021179345
出願日2021-11-02
発明の名称スフェロイド及びその作製方法
出願人株式会社日本触媒
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/071 20100101AFI20230510BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】本発明は、網状の血管構造を内部に有する神経系スフェロイドを提供することを目的とする。
【解決手段】本発明の一側面に係るスフェロイドは、神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを含み、且つ上記血管内皮細胞の集合が網状の血管構造を形成している。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを含み、且つ
前記血管内皮細胞の集合が網状の血管構造を形成している、スフェロイド。
続きを表示（約 700 文字）【請求項２】
グリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを含み、
該グリア細胞はスフェロイド表面の少なくとも一部を覆っている、請求項１に記載のスフェロイド。
【請求項３】
グリア細胞がアストロサイトである、請求項２に記載のスフェロイド。
【請求項４】
血管内皮細胞が脳微小血管内皮細胞である、請求項１～３のいずれか一項に記載のスフェロイド。
【請求項５】
幹細胞が脂肪由来幹細胞である、請求項１～４のいずれか一項に記載のスフェロイド。
【請求項６】
細胞接着性の細胞培養基材上で、神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを共培養する工程を備え、
神経細胞又はグリア細胞、幹細胞、及び血管内皮細胞のそれぞれは、共培養の開始時にスフェロイドを形成していない、請求項１～５のいずれか一項に記載のスフェロイドを作製する方法。
【請求項７】
神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを共培養する工程が、グリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを共培養する工程である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
共培養を、神経幹細胞用培地と血管内皮細胞用培地との混合培地中で行う、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
共培養を、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を含む培地中で行う、請求項６～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
細胞接着性の細胞培養基材が、フッ素化ポリイミド樹脂を含む細胞培養基材である、請求項６～９のいずれか一項に記載の方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明はスフェロイド及びその作製方法に関する。
続きを表示（約 2,000 文字）【背景技術】
【０００２】
近年、細胞を三次元培養することで、臓器の構造を模した組織を作製することに注目が集まっている。例えば、神経系の細胞と血管系の細胞とを含む神経系スフェロイドは、脳組織に類似した構造を有するため、アルツハイマー型認知症又は血管障害に起因する脳疾患の病理メカニズムの解明、及び創薬分野での薬剤スクリーニングへの応用が期待される。例えば、非特許文献１では、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）由来の神経前駆細胞からなるスフェロイドと、血管内皮細胞からなるスフェロイドとを融合させることで脳様スフェロイドを作製する試みが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
L. Song et al., Sci. Rep. 9, 5977(2019)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
神経系の細胞と血管系の細胞とを含む従来の神経系スフェロイドにおいて、血管構造は網状に形成されていなかった。本発明はかかる課題に鑑みてなされたものであり、網状の血管構造を有する神経系スフェロイドを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一側面に係るスフェロイドは、神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを含み、且つ上記血管内皮細胞の集合が網状の血管構造を形成している。
【０００６】
スフェロイドは、グリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを含んでよく、該グリア細胞はスフェロイド表面の少なくとも一部を覆っていてよい。グリア細胞はアストロサイトであってよく、血管内皮細胞は脳微小血管内皮細胞であってよく、幹細胞は脂肪由来幹細胞であってよい。
【０００７】
本発明の一側面に係るスフェロイドを作製する方法は、細胞接着性の細胞培養基材上で、神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを共培養する工程を備え、神経細胞又はグリア細胞、幹細胞、及び血管内皮細胞のそれぞれは、共培養の開始時にスフェロイドを形成していない。
【０００８】
神経細胞又はグリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを共培養する工程は、グリア細胞と、幹細胞と、血管内皮細胞とを共培養する工程であってよい。共培養は、神経幹細胞用培地と血管内皮細胞用培地との混合培地中で行ってもよい。共培養は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を含む培地中で行ってもよい。細胞接着性の細胞培養基材は、フッ素化ポリイミド樹脂を含む細胞培養基材であってよい。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、網状の血管構造を有する神経系スフェロイドが提供される。網状の血管構造を有する神経系スフェロイドは、脳組織により類似した構造を有するため、脳疾患の病理メカニズムの解明及び薬剤スクリーニングへの応用がより期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
本発明の一実施形態に係るスフェロイドの模式的な断面図である。
図２の（Ａ）及び（Ｂ）は、実施例１のスフェロイドの形成過程を示す画像である。
図３の（Ａ）は実施例１のスフェロイドの蛍光画像のｚ－スタックを横から見た画像であり、図３の（Ｂ）は実施例１のスフェロイドの水平方向の断面画像である。
図４は、実施例２のスフェロイドの形成過程を示す画像である。
図５の（Ａ）は実施例２のスフェロイドの蛍光画像のｚ－スタックを横から見た画像であり、図５の（Ｂ）は実施例２のスフェロイドの水平方向の断面画像である。
図６の（Ａ）は実施例２のスフェロイドの蛍光画像のｚ－スタックを横から見た画像であり、図６の（Ｂ）は実施例２のスフェロイドの水平方向の断面画像である。
図７は、実施例３のスフェロイドの形成過程を示す画像である。
図８の（Ａ）は実施例３のスフェロイド（ＲＯＣＫ阻害剤２０μＭ）の蛍光画像のｚ－スタックを横から見た画像であり、図８の（Ｂ）は実施例３の当該スフェロイドの水平方向の断面画像である。
図９は、実施例４のスフェロイドの形成過程を示す画像である。
図１０の（Ａ）は実施例４のスフェロイド（ＲＯＣＫ阻害剤１０μＭ）の蛍光画像のｚ－スタックを横から見た画像であり、図１０の（Ｂ）は実施例４の当該スフェロイドの水平方向の断面画像である。
図１１の（Ａ）は実施例４のスフェロイド（ＲＯＣＫ阻害剤２０μＭ）の蛍光画像のｚ－スタックを横から見た画像であり、図１１の（Ｂ）は実施例４の当該スフェロイドの水平方向の断面画像である。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許